紅豆杉多糖PSY-1的抗腫瘤活性及機制研究.pdf

1、目的：轉移是惡性腫瘤最顯著的特征之一，是大多數(shù)腫瘤病人的主要致死原因，臨床上90％以上惡性腫瘤病人死于轉移相關的并發(fā)癥，因此抑制轉移被認為是改善腫瘤治療現(xiàn)狀最有希望的突破口，因此無論在生物學領域還是醫(yī)學領域，腫瘤轉移的機制研究及藥物發(fā)現(xiàn)是經久不衰的熱點。我們在前期實驗中從南方紅豆杉的枝葉中分離、提純和鑒定了一種分子量(Mw)為106 kD的水溶性單組分紅豆杉多糖PSY-1，PSY-1在總多糖中含量最高，本研究主要圍繞PSY-1開展抗腫瘤

2、活性及相關機制研究，旨在明確PSY-1的抗腫瘤轉移作用及可能機制，為PSY-1相關藥物設計及其臨床用藥提供實驗依據，同時也將推動紅豆杉屬植物紅豆杉的開發(fā)利用。
　　方法：⑴采用磺酰羅丹明B染色法（SRB法），以紫杉醇為陽性對照檢測PSY-1對人卵巢癌細胞A2780和SKOV-3、人肝癌細胞HepG2和SMMC-7721、人前列腺癌細胞PC-3、人結腸癌細胞HT-29和鼠黑色素瘤細胞B16-F10的增殖抑制作用。⑵采用細胞劃痕修復實

3、驗及細胞Transwell實驗評價PSY-1對腫瘤細胞運動遷移能力的影響。⑶采用實時熒光定量PCR在轉錄水平考察PSY-1對基質金屬蛋白酶表達的影響。采用蛋白質印跡法考察PSY-1對基質金屬蛋白酶及其相關信號通路的蛋白表達水平的影響。采用明膠酶譜法考察PSY-1對基質金屬蛋白酶酶活性的影響。⑷建立荷瘤小鼠模型，考察PSY-1對S180肉瘤、HepA肝癌及Lewis肺癌的體內抑制作用。
　　結果：①紅豆杉多糖PSY-1對多種腫瘤細胞

4、均具有一定的增殖抑制作用，IC50在1.55 mg/mL和15.03 mg/mL之間，且在HepG2中活性最強，而在SMMC-7721中活性相對較弱，其對鼠黑色素瘤細胞B16-F10的IC50為11.97 mg/mL。②劃痕修復實驗顯示在PSY-1(0.2 mg/mL，1 mg/mL和5 mg/mL)能有效抑制B16-F10細胞的劃痕修復，且呈濃度依賴性。Transwell實驗表明PSY-1(1mg/mL和5 mg/mL)能有效抑制B1

5、6-F10細胞從上室向下室的遷移，抑制率分別為35％和50％。③RT-PCR實驗表明PSY-1(1 mg/mL和5 mg/mL)能有效降低MMP-2的mRNA表達水平，且具有濃度依賴性。明膠酶譜實驗表明PSY-1（1 mg/mL和5mg/mL）能有效抑制MMP-2和MMP-9的酶活性。蛋白免疫實驗表明PSY-1能顯著下調MMP-2和MMP-9的蛋白表達水平，PSY-1(1 mg/mL和5 mg/mL)對AKT、p38、ERK的磷酸化水平

6、無顯著影響，但能減少IκB的磷酸化。④體內動物實驗表明PSY-1能有效抑制S180肉瘤、Lewis肺癌、HepA肝癌荷瘤小鼠模型中的腫瘤生長。
　　結論：本研究表明在體外PSY-1對多株人源及鼠源腫瘤細胞的增殖具有顯著的抑制作用，在無毒劑量(0-5 mg/mL)能顯著抑制B16-F10細胞的侵襲和轉移。在體內PSY-1能抑制S180肉瘤、Lewis肺癌、HepA肝癌荷瘤小鼠模型的腫瘤生長。其抗轉移作用可能跟抑制基質金屬蛋白酶家族成