酶水解法制備水牛乳酪蛋白磷酸肽.pdf

1、酪蛋白磷酸肽是以乳酪蛋白為原料，經(jīng)單一酶或復(fù)合酶水解，再經(jīng)分離純化而得到的含有磷酸絲氨?；亩嚯?。本實(shí)驗(yàn)以水牛乳酪蛋白為原料，制備水牛乳酪蛋白磷酸肽，可以深化水牛乳的深加工，豐富水牛乳乳制品，增加水牛乳的附加值。因此開展水牛乳酪蛋白磷酸肽的研究具有重要的價值。 經(jīng)過單因素實(shí)驗(yàn)比較了Alcalase堿性蛋白酶和Neutrase中性蛋白酶對水牛乳酪蛋白水解度的影響。研究結(jié)果表明，Alcalase堿性蛋白酶的酶解效果較好。通過正交實(shí)驗(yàn)

2、，優(yōu)化出了Alcalase堿性蛋白酶酶解水牛乳酪蛋白的條件：溫度為70℃，酸度為pH 7.0，酶：底物=3.0：100，底物濃度為5.0％。在該條件下水牛乳酪蛋白溶液的水解度可以達(dá)到20.05％。 通過酶解實(shí)驗(yàn)研究，確定了用Alcalase堿性蛋白酶制備水牛乳酪蛋白磷酸肽的工藝參數(shù)，用該法可制備出水牛乳酪蛋白磷酸肽粗品，粗品經(jīng)分析檢測表明：N/P摩爾比為20，水分含量6.5％，灰分含量8.0％。 采用離子交換層析技術(shù)，開

3、展了水牛乳酪蛋白磷酸肽粗品純化工藝研究，得到了純化產(chǎn)品：經(jīng)大孔強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂純化得到的酪蛋白磷酸肽(CPP Ⅰ)的N/P摩爾比為4，經(jīng)弱堿性陰離子交換樹脂得到的酪蛋白磷酸肽(CPP Ⅱ)N/P摩爾比為6。該研究結(jié)果表明，通過離子交換技術(shù)可以精制水牛乳酪蛋白磷酸肽，而且大孔強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂的純化效果更好。通過HPLC分析測定發(fā)現(xiàn)，粗品CPP、精制品CPP Ⅰ和CPP Ⅱ分別主要集中于1，260 Da、970 Da和1，090 D

4、a分子量左右。 水牛乳酪蛋白磷酸肽的功能研究實(shí)驗(yàn)表明，酪蛋白磷酸肽可以有效地阻止磷酸鈣、磷酸亞鐵沉淀的形成，并且酪蛋白磷酸肽的N/P摩爾比越低，含量越高，阻止效果越好。在pH為8.0時有利于酪蛋白磷酸肽阻止磷酸鈣沉淀的形成；在100℃以下，溫度的變化對酪蛋白磷酸肽的功能沒有很大影響；檸檬酸與酪蛋白磷酸肽有一定的協(xié)同作用，在酪蛋白磷酸肽含量一定的情況下，增加檸檬酸的含量會阻止磷酸鈣沉淀形成的時間；木糖醇與酪蛋白磷酸肽也具有一定的協(xié)