TGF-β1-Smad信號通路蛋白、MMP-14與間充質(zhì)干細胞在血管損傷中的表達及意義.pdf

1、目的：通過建立大鼠頸總動脈損傷模型，觀察損傷后血管內(nèi)膜的形態(tài)變化并檢測新生內(nèi)膜中TGF-β1/Smad信號通路、MMP-14及間充質(zhì)干細胞（MSC）標記物的蛋白表達，探討其相關(guān)關(guān)系并且與新生內(nèi)膜形成的關(guān)系，為深入研究血管損傷后新生內(nèi)膜發(fā)生發(fā)展的作用機制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：建立大鼠頸總動脈球囊損傷模型。選取350g-400g SD大鼠42只，隨機分為7組，分別為空白對照組、損傷后0h,1d,3d,7d,14d,21d組。在各時間點

2、截取損傷段頸總動脈，在HE染色觀察其形態(tài)及狹窄程度的基礎(chǔ)上，應(yīng)用免疫組化、免疫熒光及westernblot法檢測TGF-β1/Smad信號通路相關(guān)蛋白（TGF-β1、TGF-β1-RI、p-Smad2/3、Smad2/3）、MMP-14及間充質(zhì)干細胞標記物蛋白（Nestin、CD29）在損傷后血管內(nèi)的表達，并檢測平滑肌標記物 Calponin、增殖標記物 Ki-67、間葉標記物V imentin、細胞外基質(zhì)CollagenIII的蛋白表

3、達以探討TGF-β1/Smad信號通路與MMP-14的相關(guān)關(guān)系、其招募MSCs的作用及其調(diào)控間充質(zhì)干細胞對新生內(nèi)膜形成可能發(fā)揮的作用。
　　結(jié)果：⑴正常對照組及動脈損傷后0h、1d、3d組中，血管內(nèi)膜均未見新生內(nèi)膜，于7d、14d、21d組中可見明顯新生內(nèi)膜，三組間的差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。⑵Westernblot法檢測TGF-β1/Smad信號通路蛋白TGF-β1、p-Smad2/3、Smad2/3的蛋白表達量，

4、其蛋白表達趨勢一致，均為7d組開始顯著增高，至14d組時表達量最高，21d組中表達量降低。而MMP-14的蛋白表達量于3d組開始顯著增高，14d達最大值，21d下降。免疫組化檢測 TGF-β1/Smad信號通路蛋白 TGF-β1、TGF-β1-RI、p-Smad2/3及MMP-14于對照組、動脈損傷后0h、1d、3d組中均未見明顯表達，而于7d組、14d組及21d組新生內(nèi)膜中顯著表達，均為14d組中表達強度最高。⑶Westernblot

5、法檢測間充質(zhì)干細胞標記物Nestin蛋白表達，其僅在7d、14d組中表達，且14d組中蛋白表達量顯著高于7d組（P<0.001）；免疫熒光法檢測損傷血管中間充質(zhì)干細胞標記物Nestin和CD29的表達，于7d組和14d組新生內(nèi)膜管腔面可見陽性細胞分布，且14d組中陽性細胞數(shù)顯著高于7d組陽性細胞數(shù)，對照組及其他損傷組中未見陽性表達。⑷Westernblot法檢測Calponin、V imentin及CollagenIII蛋白表達，可見損

6、傷血管中同時表達Calponin及V imentin，且均為7d開始增高，14d時表達量最高，21d下降。CollagenIII于7d、14d及21d組中顯著高表達，且14d組表達量低于7d及21d組，損傷后21d時，其表達量最高。免疫組化檢測Calponin、V imentin可見二者均表達于新生內(nèi)膜細胞，且K i-67檢測于14d時陽性指數(shù)最高，CollagenIII同樣分布于新生內(nèi)膜中。1
　　結(jié)論：①大鼠頸總動脈球囊損傷可