雄激素受體剪接變異體核轉(zhuǎn)位功能障礙的機制研究.pdf

1、1、 HSP90在AR基因pre-mRNA剪接變異體核轉(zhuǎn)位障礙中的作用
　　研究目的:明確HSP90在雄激素受體剪接變異體核轉(zhuǎn)位障礙中的作用，闡述其與PCOS患者高雄狀態(tài)之間的關(guān)系。
　　研究方法:建立過表達細胞模型，使用免疫熒光技術(shù)，分析由不同AR剪接變體編碼的蛋白質(zhì)核轉(zhuǎn)位能力的差異。并通過Co-IP和Western Blot技術(shù)分析AR剪接變異體與HSP90的結(jié)合親和力的改變。同時利用免疫熒光技術(shù)檢測AR剪接變異體與HS

2、P90的亞細胞共定位變化。
　　研究結(jié)果:免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)過表達模型在雄激素暴露2小時后野生型AR絕大部分入核，而兩種剪接變異體（缺失型AR和插入型AR）大部分仍集中在胞漿中，入核明顯減少，出現(xiàn)核轉(zhuǎn)位障礙;免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)未受到雄激素刺激時兩種雄激素受體剪接變異體與野生型雄激素受體相比結(jié)合了更多的HSP90，在雄激素刺激后，兩種剪接變異體與HSP90的結(jié)合出現(xiàn)了明顯的下降。共定位實驗顯示雄激素暴露后兩種剪接變異體與HSP90的共

3、定位主要出現(xiàn)在胞漿中，并且共定位明顯減少。
　　結(jié)論:雄激素受體剪接變異體與HSP90的結(jié)合出現(xiàn)異常，可能是其核轉(zhuǎn)位障礙的重要原因。
　　2、 Importinα在AR基因pre-mRNA剪接變異體核轉(zhuǎn)位障礙中的作用
　　研究目的:明確importinα在雄激素受體剪接變異體核轉(zhuǎn)位障礙中的作用，闡述其與PCOS患者高雄狀態(tài)之間的關(guān)系。
　　研究方法:建立過表達細胞模型，使用免疫熒光技術(shù)，分析由不同AR剪接變體編碼

4、的蛋白質(zhì)核轉(zhuǎn)位能力的差異。并通過Co-IP技術(shù)分析造成這種核轉(zhuǎn)位差異的可能機制。將沉淀下來的蛋白質(zhì)復合物進行Western Blot以檢測與核轉(zhuǎn)位過程關(guān)系密切的蛋白質(zhì)importinα以分析雄激素受體的野生型和剪接變體與其結(jié)合解離能力的差異，從而闡明AR剪接變體與高雄的關(guān)系。
　　研究結(jié)果:免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)過表達模型在雄激素暴露2小時后野生型AR絕大部分入核，而兩種剪接變異體（缺失型雄激素受體和插入型雄激素受體）大部分仍集中在胞漿