CXCL16在免疫性肝損傷中的作用.pdf

1、本研究首先，利用抑制消減雜交技術(shù)，構(gòu)建了免疫性肝損傷基因文庫，并對基因文庫進行大規(guī)模測序和分析。通過搜索HTGS數(shù)據(jù)庫，有4個基因為未登錄的新基因，一個序列提交后在NCBI的登錄號為：AY601814。在基因文庫上調(diào)的基因中，還有一個CXCL16趨化因子，初步檢索和分析表明它是一個新發(fā)現(xiàn)的具有特殊結(jié)構(gòu)功能的趨化因子，它既能以分泌型，又能以膜結(jié)合型存在，對激活的T細胞、NK細胞及NKT細胞具有強烈的趨化作用，提示它可能是一個很有意義的分子

2、。 其次，為了研究CXCL16在免疫性肝損傷中的作用，選擇并復(fù)制了國際公認的BCG-LPS誘導(dǎo)的小鼠免疫性肝損傷模型，根據(jù)血清ALT的水平、促炎癥物質(zhì)TNF-α的表達變化、肝臟組織浸潤單核細胞的數(shù)量變化以及肝臟病理變化指標，確定模型的成功建立。利用TaqMan探針的實時熒光定量PCR檢測CXCL16在模型小鼠肝組織中的表達變化，同時比較了其它趨化因子在免疫性肝損傷組織的表達譜。另外，通過免疫組化定位分析，檢測了CXCL16蛋白的

3、在免疫性肝損傷組織中的表達變化和分布，比較了CXCL16的表達水平與肝臟損傷程度的相關(guān)性。 再次，為了進一步研究CXCL16在免疫性肝損傷中的作用及其機制，克隆了CXCL16基因，通過原核表達系統(tǒng)表達和純化CXCL16融合蛋白，免疫動物并制備純化了它的特異性抗體。純化后的融合蛋白經(jīng)趨化實驗表明它保持原有的生物活性，其ED50(達到50％趨化活性時的重組蛋白濃度)約為10～20ng/ml。 最后，基于CXCL16在免疫性肝