腺相關病毒增強型小鼠白介素10質粒的構建及表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、一目的:1構建腺相關病毒增強型小鼠白介素10質粒(pORF-ITR-mIL-10)并進一步證實ITR能增加mIL-10在心肌細胞內的表達,為體內實驗提供必要的實驗依據.二方法:1利用分子克隆技術,將AAV中的ITR插在pORF5-mIL-10質粒啟動子的上游,構建pORF-ITR-mIL-10質粒.2在陽離子脂質體Lipofectin介導下,pORF5-mIL-10和pORF-ITRS-mIL-10分別轉染原代培養(yǎng)心肌細胞.3 Triz

2、ol一步法提取總RNA,RT-PCR檢測mIL-10的mRNA.4 ELISA檢測培養(yǎng)細胞上清中mIL-10的表達.三結果:1用雙酶切方法證實成功構建pORF-ITR-mIL-10.2分別在轉染24h、48h、72h、96h、120h后,用RT-PCR在心肌細胞中檢測到相應的目的條帶.3 ELISA檢測顯示pORF-ITR-mIL-10的表達量明顯高于pORF5-mIL-10.四結論:1在陽離子脂質體Lipofectin介導下,pORF

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