膽囊癌微環(huán)境下MDSCs及其亞群細胞檢測和干預治療研究.pdf

1、研究背景:膽囊癌(Gallbladder Cancer)是膽道系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤。膽囊癌的病因及發(fā)病機制目前還未研究清楚。早期缺乏特異性臨床表現(xiàn)，致使診斷常被延誤，出現(xiàn)腹痛或黃疸等癥狀時多為中、晚期表現(xiàn)。此外，膽囊癌具有局部侵犯、廣泛區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管及遠處轉(zhuǎn)移的特性，是侵襲性最高的膽道系統(tǒng)腫瘤?；颊叨嘁蚰懝苁苣[瘤侵犯或出現(xiàn)肝十二指腸韌帶淋巴結(jié)、腹腔廣泛轉(zhuǎn)移等情況，出現(xiàn)黃疸、乏力和惡病質(zhì)等全身癥狀。絕大多數(shù)病人確診時已屬晚期，喪失了

2、有效治療的機會。雖然外科手術治療仍為臨床治療首選，徹底的手術切除仍是膽囊癌唯一有可能的治愈方式，但膽囊癌手術切除遠期療效不能確定。膽囊癌對放療、化療均不敏感，目前臨床仍缺乏令人滿意的治療方案。發(fā)現(xiàn)和研究新的特異性治療方法是提高膽囊癌治療效果的迫切要求，多種治療方法聯(lián)合應用的個體化綜合治療方案將是改善膽囊癌預后的希望所在。
　　目前研究表明，雖然機體免疫系統(tǒng)可以產(chǎn)生抗腫瘤免疫應答，但腫瘤仍能在體內(nèi)不斷生長。針對這個問題，學界提出了“

3、腫瘤微環(huán)境”的概念。腫瘤微環(huán)境是腫瘤發(fā)生生長過程中所處的內(nèi)環(huán)境，由腫瘤細胞、基質(zhì)細胞、免疫炎性浸潤細胞、微血管、組織液及多種細胞因子等共同構(gòu)成。其代謝微環(huán)境的一個重要生物學特征即組織缺氧、間質(zhì)高壓、免疫炎性因子浸潤。這些微環(huán)境中的生長因子、細胞趨化因子及免疫炎性因子與相關受體之間相互作用，促進了腫瘤的生長、增殖、侵襲及遷移。研究腫瘤微環(huán)境的復雜機制，對臨床改善腫瘤微環(huán)境、更為有效的治療腫瘤有著重要的意義。研究發(fā)現(xiàn)，髓源性抑制細胞(MDS

4、Cs)是來源于未成熟髓系細胞不同分化階段的異質(zhì)性細胞群體，在病理條件下可以誘導免疫抑制、介導免疫耐受，促使腫瘤逃逸機體的免疫監(jiān)視和攻擊，促進慢性感染及腫瘤的發(fā)生發(fā)展，是一群在病理條件下產(chǎn)生的具有顯著的負向免疫調(diào)控功能的天然免疫細胞，集中分布在外周血、脾臟、淋巴結(jié)、骨髓及腫瘤微環(huán)境等部位。MDSCs表面標記具有顯著的異質(zhì)性，缺乏公認的通用表型，在研究中采用目前應用最多的人Lin-HLA-DR-CD33+和小鼠CD11b+Gr-1+表達模式

5、作為其表面標志。通過消除MDSCs及其趨化因子受體亞群細胞，促進不成熟的MDSCs分化為成熟的髓細胞，可以消除其對免疫系統(tǒng)的抑制性，將有助于腫瘤的治療。如何有效降低MDSCs及其亞群細胞在活體中的數(shù)量和功能、減輕其對免疫細胞的抑制，將對癌癥和其他疾病的臨床治療起到重要作用。
　　研究目的:通過本課題的研究，對膽囊癌腫瘤微環(huán)境中的MDSCs及其趨化因子受體亞群細胞進行篩選及鑒定，并進一步通過調(diào)控MDSCs及亞群細胞，探討MDSCs參

6、與膽囊癌腫瘤微環(huán)境的免疫應答變化及相關機制，通過阻斷腫瘤免疫逃逸過程以減輕腫瘤宿主機體的免疫抑制狀態(tài)，更加深入地認識機體維持免疫穩(wěn)定、抑制自身免疫、控制移植排斥、調(diào)控感染免疫、以及腫瘤微環(huán)境中免疫功能狀態(tài)等方面的機制，從而為以誘導抗腫瘤免疫應答的免疫干預措施來防治腫瘤免疫相關疾病提供有力的理論指導與實踐措施。
　　研究方法:
　?、偻ㄟ^采集人膽囊癌血樣及腫瘤組織，利用免疫組化及流式細胞技術定性、定量分析腫瘤組織微環(huán)境中MDS

7、Cs。
　?、谕ㄟ^人源性膽囊癌細胞系建立裸鼠荷瘤動物模型，流式細胞術篩選、鑒定、定量分析腫瘤組織微環(huán)境中MDSCs及其趨化因子受體亞群細胞。
　?、弁ㄟ^建立藥物干預MDSCs亞群細胞裸鼠荷瘤模型，進行了解MDSCs亞群細胞靶向調(diào)控對裸鼠膽囊癌腫瘤微環(huán)境影響的可行性研究。
　　研究結(jié)果:
　　①成功建立了人源性膽囊癌細胞裸鼠荷瘤動物模型及MDSCs趨化因子受體干預模型;
　?、谕ㄟ^流式細胞術對人膽囊癌血樣、腫

8、瘤組織及荷瘤裸鼠的膽囊癌組織和脾臟組織進行分析，分別檢測出表面標志為Lin-HLA-DR-CD33+人膽囊癌MDSCs細胞和CD11b+Gr-1+荷瘤裸鼠MDSCs細胞;
　?、圻M一步通過流式細胞術分選鑒定MDSCs亞群細胞，檢測出CXCR2及CX3CR1亞群細胞，未鑒定出CCR2亞群細胞;
　?、芡ㄟ^干預MDSCs趨化因子受體亞群細胞后可以發(fā)現(xiàn):予以干預后各干預組瘤塊體積較對照組明顯減小;應用替吉奧（以替加氟計）后，裸鼠腫

9、瘤組織及其脾臟組織MDSCs及其亞群比例較對照組趨勢明顯升高，維生素D3、塞來昔布、辛伐他汀及受體阻斷劑SBSS比例較對照組趨勢降低;受體阻斷藥物辛伐他汀對CX3CR1和SBSS對CXCR2的阻斷趨勢更為明顯。
　　研究結(jié)論:
　　①在人源性膽囊癌細胞裸鼠荷瘤動物模型所建立的膽囊癌腫瘤微環(huán)境中廣泛存在髓源抑制性細胞并可依據(jù)趨化因子受體不同可將膽囊癌腫瘤微環(huán)境及脾臟內(nèi)的MDSCs可以分為CXCR2及CX3CR1趨化因子受體亞群

10、細胞;
　?、谕瑫r針對MDSCs及趨化因子受體亞群細胞進行藥物干預研究，發(fā)現(xiàn)能夠有效的改善腫瘤微環(huán)境、抑制腫瘤組織的生長，研究發(fā)現(xiàn)雖然替吉奧對膽囊癌細胞具有明顯的殺傷效果，但與文獻報道不同，其對膽囊癌組織及其脾臟組織中的MDSCs的影響微小;
　?、蹜泌吇蜃邮荏w阻斷劑辛伐他汀及SBSS，均能有效降低腫瘤微環(huán)境內(nèi)MDSCs及相應亞群細胞的表達比例，在減少膽囊癌微環(huán)境中MDSCs聚積的同時阻斷了相應趨化因子受體的表達。