文心蘭再生體系的建立與GAI基因轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、本研究以文心蘭為試驗(yàn)材料，獲得了文心蘭莖尖為外植體的再生體系。試驗(yàn)結(jié)果表明：文心蘭莖尖原球莖誘導(dǎo)最佳激素配比MS+6-BA6.0mg/L+NAA0.15mg/L的培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)25d后可形成大量原球莖，30d左右繼代1次，繼代初期原球莖增殖倍數(shù)約為3.5，繼代3代后增殖倍數(shù)約為6.5。原球莖材料經(jīng)培養(yǎng)累積到一定量時(shí)，將所得的原球莖切塊接種到激素配比為MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.15mg/L+5％椰子水時(shí)，有利不定芽的分化。

2、帶叢芽的組織塊接種在1/2MS+1.0mg/LIBA4+10％椰子水培養(yǎng)基上，15d后生根；25d后小苗基部可分化出長(zhǎng)1cm左右的根，生根率達(dá)95％。 測(cè)定了原球莖對(duì)Kan的抗性。以控制植物莖伸長(zhǎng)的GAI基因?yàn)槟康幕?，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化法，同時(shí)研究了對(duì)轉(zhuǎn)化植物的預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、浸染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間、添加乙酰丁香酮對(duì)農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化率的影響等試驗(yàn)。結(jié)果表明：原球莖對(duì)Kan的敏感濃度為100mg/L、不需要預(yù)培養(yǎng)、農(nóng)桿菌浸染原球莖最

3、適時(shí)間為20mim、共培養(yǎng)時(shí)間為2d、加入100mg/L乙酰丁香酮(AS)有利于轉(zhuǎn)化率的提高。受體材料在無(wú)選擇壓力的培養(yǎng)基培養(yǎng)2d，再轉(zhuǎn)接有選擇壓力的篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可使轉(zhuǎn)化率明顯提高.受體材料接種到培養(yǎng)基(MS+6-BA6.0mg/L+NAA0.15mg/L+300mg/LCef+100mg/LKan)，30d后可形成大量原球莖，把帶有原球莖的芽接種到培養(yǎng)基(MS+0.50mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+5％椰子水+Kan