缺血預(yù)處理對(duì)肝缺血再灌注損傷肝細(xì)胞鈣影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過肝缺血預(yù)處理，利用激光掃描共聚焦顯微技術(shù)觀測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)Ca2+變化，為缺血預(yù)處理對(duì)肝缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制補(bǔ)充理論依據(jù)。 方法：成年健康雄性豚鼠24只，體重300～350g,以體重為標(biāo)準(zhǔn)，按隨機(jī)表配對(duì)分成3組：對(duì)照組(A組)，缺血預(yù)處理組(B組)和缺血再灌注組(C組)，每組8只。模擬Pringle法。常溫下阻斷肝門，45min后恢復(fù)血流，對(duì)肝臟持續(xù)再灌注，造全肝熱缺血再灌注模型。A組干擾腹腔125min后取標(biāo)本；B組缺

2、血5min再灌注5min二次作預(yù)處理，缺血45min再灌注60min后取標(biāo)本；C組缺血45min再灌注60min后取標(biāo)本。觀察動(dòng)物活體肝臟；右肝組織標(biāo)本常規(guī)HE染色，光鏡下觀察；測(cè)腔靜脈血丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)；組織標(biāo)本熒光試劑Fluo-3/AM負(fù)載，激光掃描共聚焦顯微鏡觀測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度及其分布。 結(jié)果：觀察動(dòng)物活體肝臟：所有動(dòng)物肝臟缺血前均紅潤光亮質(zhì)軟，均勻一致。A組干預(yù)前后肝臟質(zhì)

3、地?zé)o明顯差異；B組干預(yù)后見肝臟稍變暗，稍腫脹；C組干預(yù)后見肝臟明顯變暗，明顯腫脹。低倍鏡下觀察：A組見肝索完整，肝細(xì)胞排列有序無水腫變性，肝竇無擴(kuò)張、淤血，無炎細(xì)胞浸潤等；B組見肝索基本完整，肝細(xì)胞排列有序，稍水腫，肝竇稍擴(kuò)張，未見炎細(xì)胞浸潤；C組見肝索不完整，肝細(xì)胞排列紊亂，水腫變性，肝竇擴(kuò)張，炎細(xì)胞浸潤。高倍鏡下觀察：A組見肝細(xì)胞形態(tài)正常；C組見肝細(xì)胞腫脹，空泡變性及點(diǎn)狀壞死；B組見散在肝細(xì)胞腫脹變性，其程度和范圍明顯輕于缺血再灌注

4、組。ALT含量A組低于C組二者差異有顯著性(p＜0.01)；B組低于C組二者差異有顯著性(p＜0.05)；AST含量A組低于C組二者差異有顯著性(p＜0.05)；B組低于C組二者差異有顯著性(p＜0.05)；激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察：熒光強(qiáng)度代表肝細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度，熒光強(qiáng)度越強(qiáng)則濃度越高，反之則越低。標(biāo)本細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子熒光強(qiáng)度(OD值)A組低于C組二者有顯著性差異(p＜0.05)；B組低于C組二者有顯著性差異(p＜0.05)。三