Carfilzomib抑制腸癌細胞生長及增加CPT-11化療敏感性的機制探討.pdf

1、目的：觀察Carfilzomib（CFZ）及其聯(lián)合伊利替康（CPT-11）對NF-κB高表達的腸癌細胞株SW620生長增殖、細胞周期、細胞凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移的作用，并探討兩藥聯(lián)合對腸癌的作用機理；分析在SW620裸鼠移植瘤模型中，CFZ與CPT-11的協(xié)同抗腫瘤作用，并分析可能的作用機制。
　　方法：以NF-κB高表達的腸癌細胞株SW620為主要研究對象，NF-κB低表達的腸癌細胞株HCT8為對照，應(yīng)用WST-1法和平板集落生長實驗檢

2、測不同濃度CFZ與CPT-11對結(jié)直腸癌細胞生長增殖與克隆形成作用，并以CI指數(shù)分析兩藥聯(lián)合是否具有協(xié)同作用；CFZ單藥及聯(lián)合CPT-11體外作用48小時，應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測藥物對細胞周期的影響；流式AnnexinV/PI法、TUNEL法檢測藥物作用48小時對腸癌細胞早期凋亡和晚期凋亡的誘導(dǎo)，流式caspase3和CD95檢測凋亡相關(guān)分子的表達；劃痕實驗、Transwell法及Matrigel膠實驗檢測藥物作用后腸癌細胞侵襲遷移能力的改

3、變；同時應(yīng)用EMSA與蛋白免疫印跡檢測CFZ單藥及聯(lián)合CPT-11作用下對NF-κB及其相關(guān)生長增殖通路分子的影響；建立SW620裸鼠移植瘤模型，觀察兩藥聯(lián)合作用對腸癌的體內(nèi)生長抑制作用。
　　結(jié)果：CFZ在體外能夠抑制腸癌SW620細胞的生長、增殖及克隆形成，且與CPT-11聯(lián)合具有協(xié)同作用，其機制與NF-κB活性的抑制，survivin蛋白水平的下調(diào)，MEK/ERK通路的阻斷以及PI3K/AKT通路的去磷酸化失活相關(guān)。CFZ及

4、其與CPT-11聯(lián)合作用改變SW620細胞周期，使SW620細胞阻滯于G2/M期，Western Blot檢測顯示周期相關(guān)蛋白p21WAF1/CIP上調(diào)，cyclinB1、cdc25c下調(diào)。CFZ單藥及與CPT-11聯(lián)合作用促進SW620細胞凋亡，可能與CD95、caspase3、p-p38及ATF3蛋白的活化等相關(guān)。CFZ單藥及與CPT-11聯(lián)合具有抑制腸癌SW620細胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用，與MMPs的失活和TIMPs蛋白活性的上調(diào)相關(guān)。

5、兩藥聯(lián)合作用比單藥明顯抑制SW620裸鼠移植瘤生長，促進移植瘤細胞的凋亡，且與NF-κB的活性抑制相關(guān)。
　　結(jié)論：CFZ與CPT-11聯(lián)合在體內(nèi)外均具有協(xié)同抗腸癌作用。CFZ及其與CPT-11聯(lián)合能夠抑制腸癌SW620細胞的生長增殖作用，且與NF-κB相關(guān)的通路抑制有關(guān)；通過上調(diào)p21WAF1/CIP,下調(diào)cyclinB1和cdc25c，使SW620細胞阻滯于G2/M期；通過活化CD95、caspase3、p-p38及ATF3促