山葡萄CBF低溫反應(yīng)途徑相關(guān)基因的克隆及植物表達載體的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、擬南芥CBF(CRT/DRE binding factor)轉(zhuǎn)錄因子在冷應(yīng)答途徑中具有重要作用，一個CBF轉(zhuǎn)錄因子能激活下游眾多與抗逆有關(guān)的功能基因的表達。雖然植物中存在多條冷應(yīng)答途徑，但目前對CBF途徑的研究最為深入，功能最確切，所以CBF基因家族是植物抗寒分子育種的首選目標(biāo)。 本文利用PCR技術(shù)首次從山葡萄(Vitis amurensis)中分離并克隆了兩個新的CBF基因(基因銀行注冊號碼為DQ517297和DQ517298

2、)，分別命名為VaCBF2和VaCBF3；同時，構(gòu)建了兩基因的植物表達載體。主要研究結(jié)果如下： 1.通過將GenBank上發(fā)表的幾種植物的CBF同源基因進行比較在其保守區(qū)域設(shè)計一對兼并引物，采用PCR方法從山葡萄cDNA中獲得兩個大小分別為536bp和527bp的CBF基因中間片段，并進行了克隆，測序。 2.在兩中間片段區(qū)域分別設(shè)計了兩對特異引物，采用反向PCR方法對山葡萄CBF基因的5’和3’端的非編碼區(qū)進行克隆，結(jié)果

3、分別得到兩長度約1200bp和1000bp的片段。與中間片段拼接后預(yù)測基因全長區(qū)域。 3.在預(yù)測的全長區(qū)域的非編碼區(qū)分別設(shè)計一對特異引物對山葡萄基因組進行擴增，分別得到954bp和885bp的片段。經(jīng)測序證實得到的序列即為CBF基因全長，分別命名為VaCBF2和VaCBF3。 4.應(yīng)用DNAMAN軟件將VaCBF2和VaCBF3全長與Genebank上發(fā)表的幾種植物CBF基因進行氨基酸同源性比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)VaCBF2和V

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