豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因的表達(dá)及其特性.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)主要引起懷孕母豬的繁殖障礙以及仔豬的呼吸道癥狀，自1987年首次報道以來，已形成全球性流行并造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。該病的病原為PRRSV，隨著毒株的毒力變異，新的強(qiáng)毒株不斷出現(xiàn)，并能引起免疫過的豬場發(fā)病，而且人工致弱的疫苗毒也能返強(qiáng)而引起臨床疾病。目前，針對該病尚無有效的治療措施，因此加強(qiáng)對該病的監(jiān)測尤為重要。本文分別用原核和真核表達(dá)系統(tǒng)對PRRSV核衣殼蛋白基因進(jìn)行表達(dá)，并對目的基因蛋白的表達(dá)進(jìn)行了分析，

2、證明其具有良好的抗原性，為該病的監(jiān)測和防控奠定一定的基礎(chǔ)。 一、豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因在大腸桿菌中的表達(dá)用RT-PCR擴(kuò)增出PRRSV YC/2007株核衣殼蛋白(N)基因，首先克隆到pGEM-T easy載體，再克隆到表達(dá)載體pGEX-6P-1中谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)基因的下游，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL2l，實現(xiàn)了PRRSV核衣殼蛋白基因在原核表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)。經(jīng)SDS-PAGE和Western blot

3、方法對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分析，結(jié)果表明GST-N融合蛋白的分子量約為39.5kDa，另外還有一大小為30.5 kDa左右的GST-N融合蛋白的降解產(chǎn)物。證明了表達(dá)產(chǎn)物的特異性。 二、豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)本試驗將PRRSV YC/2007株核衣殼蛋白基因克隆到轉(zhuǎn)座載體pFastBacl中，然后將含有PRRSV核衣殼蛋白基因的表達(dá)盒轉(zhuǎn)座到穿梭載體Baemid中。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞，獲得了重組桿