人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2真核表達質粒的制備、轉染及表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討B(tài)MP-2轉染骨髓基質細胞的最佳轉染條件和方法，制備含人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(hBMP-2)基因的真核表達質粒，將其轉染到兔骨髓基質細胞中使之穩(wěn)定表達hBMP-2。獲得可穩(wěn)定高效表達骨形態(tài)發(fā)生蛋白的骨髓基質細胞，為最終臨床應用奠定實驗基礎，同時也為探索組織工程化骨的構建方法提供新思路。 方法：實驗分2組，A組：空白組(未做基因轉染)；B組：實驗組(轉染BMP-2基因組)。1、逆轉錄聚合酶鏈反應擴增出hBMP-2目的DNA

2、片段。通過連接酶連入真核質粒pcDNA3.1中，經大腸桿菌JM109.2擴增和篩選，構建出重組真核質粒pcDNA3.1-hBMP-2。2、通過脂質體法將所得到的重組真核質粒轉染到兔骨髓基質細胞中，用G418進行梯度篩選，從而獲得能夠穩(wěn)定表達hBMP-2的細胞克隆。3、采用逆轉錄酶鏈反應(RT-PCR)檢測培養(yǎng)MSCs中hBMP-2mRNA的表達。 結果：1、重組質粒通過EcoRI酶切后，電泳圖示約1.5kb的hBMP-2的目的片

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