自體激活雪旺細(xì)胞與人胚胎神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合移植治療脊髓損傷的研究.pdf

1、[目的] 通過觀察Wistar成鼠自體激活雪旺細(xì)胞和人胚神經(jīng)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)的生長(zhǎng)特性及相互作用，將上述兩種細(xì)胞移植入大鼠脊髓急性損傷部位，對(duì)脊髓損傷恢復(fù)情況進(jìn)行行為學(xué)、神經(jīng)電生理學(xué)和組織學(xué)評(píng)價(jià)，探討雪旺細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞在脊髓損傷修復(fù)過程中所起的作用，并評(píng)價(jià)該治療方法的效果。 [方法] 分別從Wistar成鼠股神經(jīng)和人胚胎腦皮層中體外分離獲得原代自體激活雪旺細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞，進(jìn)行純化和體外傳代培養(yǎng)。待神經(jīng)干細(xì)胞穩(wěn)定傳4代后，

2、進(jìn)行神經(jīng)巢蛋白(Nestin)免疫熒光染色以鑒定神經(jīng)干細(xì)胞。將兩種細(xì)胞共培養(yǎng)。同時(shí)建立大鼠脊髓損傷動(dòng)物模型，并將40只Wistar成鼠(雌性，體重200±30g)分為4組：空白對(duì)照組；自體激活雪旺細(xì)胞移植組；神經(jīng)干細(xì)胞移植組；神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合自體激活雪旺細(xì)胞移植組。將預(yù)先準(zhǔn)備好的DMEM；雪旺細(xì)胞；神經(jīng)干細(xì)胞；共培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞和雪旺細(xì)胞，分別對(duì)應(yīng)于上述4組移植實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的脊髓損傷部位。術(shù)后每周對(duì)患肢進(jìn)行功能評(píng)價(jià)。12周后每組隨機(jī)選擇2只動(dòng)

3、物進(jìn)行10％BDA神經(jīng)順行示蹤標(biāo)記，標(biāo)記2周后(術(shù)后14周)處死動(dòng)物。取出動(dòng)物損傷段脊髓作5μm快速冰凍切片后，進(jìn)行Cy3熒光染色、熒光免疫組化及HE染色，染色切片經(jīng)顯微圖像分析軟件Imageproplus分析處理。脊髓損傷術(shù)后每周每組隨機(jī)選取5只大鼠采用NICOLETVikingIVB型肌電圖儀進(jìn)行體感誘發(fā)電位(Somatosensoryevokedpotential,SEP)檢查，計(jì)算出修復(fù)后的神經(jīng)電興奮的傳導(dǎo)速度，與正常鼠比較求比

4、值。采用方差分析(ANOVA)及SNK-q進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 [結(jié)果] 從人胚胎腦皮層及成鼠體內(nèi)分離獲得的神經(jīng)干細(xì)胞和自體激活雪旺細(xì)胞經(jīng)分離純化后在體外穩(wěn)定傳4代，神經(jīng)巢蛋白(Nestin)免疫熒光染色陽性，雪旺細(xì)胞鏡下從形態(tài)上即可確定。 人胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和自體激活雪旺細(xì)胞共培養(yǎng)生長(zhǎng)良好。術(shù)后混合細(xì)胞移植組和雪旺細(xì)胞移植組大鼠后肢感覺和運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)較另外二組明顯；BDA順行示蹤，HE染色、熒光免疫組化染色顯示混合細(xì)胞移植