角膜內(nèi)皮細(xì)胞體外增殖性研究及組織體外構(gòu)建.pdf

1、閱暨南大學(xué)周眨匕學(xué)位論文題名角膜內(nèi)皮細(xì)胞體外增殖性研究及組織體外構(gòu)建作者姓名指導(dǎo)教師姓名學(xué)位、職稱學(xué)科專業(yè)名稱論文提交日期論文答辯日期答辯委員會(huì)主席論文評(píng)閱人學(xué)位授予單位和日期李妹燕吳靜副研究員博士眼科學(xué)角膜病與角膜移植年月年月角膜內(nèi)皮細(xì)胞體外增殖性研究及組織體外構(gòu)建摘要目的通過觀察層粘連蛋白對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞骨架及細(xì)胞增殖性的影響，探討細(xì)胞骨架的改變與細(xì)胞增殖的相關(guān)性研究層粘連蛋白和表皮生長(zhǎng)因子單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖性的影響通

2、過觀察體外培養(yǎng)貓角膜內(nèi)皮組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，探尋角膜組織體外構(gòu)建的最佳載體材料及方法。方法分別在基礎(chǔ)培養(yǎng)液和添加層粘連蛋白的培養(yǎng)液中培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期，考馬斯亮藍(lán)細(xì)胞骨架染色，并分析細(xì)胞增殖及細(xì)胞骨架改變的相關(guān)性倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及數(shù)目變化，計(jì)數(shù)、、、、的細(xì)胞數(shù)目并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期用組織培養(yǎng)的方法，以保留后彈力膜的脫水豬角膜基質(zhì)為載體，體外重建貓角膜內(nèi)皮組織，并觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu)。結(jié)果層粘連蛋白

3、組處于一期細(xì)胞比例較對(duì)照組顯著提高，一期細(xì)胞比例顯著下降，提示層粘連蛋白促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞合成，及細(xì)胞分裂增殖光鏡下，對(duì)照組細(xì)胞分布成團(tuán)狀，細(xì)胞密度較低，細(xì)胞間連接緊密，細(xì)胞內(nèi)微絲結(jié)成網(wǎng)狀，細(xì)胞核大小一致與對(duì)照組相比，層粘連蛋白組細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，細(xì)胞密度高，向周邊伸出大量板狀及絲狀偽足，細(xì)胞內(nèi)微絲增多、拉長(zhǎng)、集結(jié)成束，伸入偽足中，細(xì)胞核形狀大小不一致倒置顯微鏡觀察及細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示，各組細(xì)胞數(shù)目隨時(shí)間增加而明顯增多，各實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組增生顯著，和

4、聯(lián)合應(yīng)用組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞數(shù)目最高實(shí)驗(yàn)組處于期和期細(xì)胞數(shù)目增加，期細(xì)胞數(shù)目減少提示、單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用均可促進(jìn)細(xì)胞增殖，但尚不能認(rèn)為二者有交互作用倒置顯微鏡下，組織培養(yǎng)的貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞排列成密集的單層，細(xì)胞間連接緊密組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)的貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞形成完整的內(nèi)皮層，貼附于脫水基質(zhì)的后彈力膜上，與正常的角膜內(nèi)皮組織結(jié)構(gòu)相似掃描電鏡下，組織培養(yǎng)的貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞間緊密鑲嵌排列，可見某些細(xì)胞呈近似六邊形排列，細(xì)胞大小不甚一致，胞核清晰。結(jié)論層粘連蛋