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文檔簡介
1、[目的] 運用生化、組織、行為學方法評價D一半乳糖引發(fā)老年性癡呆(Alzheimer’sDisease，AD)小鼠模型，測定海馬腦區(qū)甘丙肽及其受體表達的變化；探討甘丙肽在AD發(fā)生過程中可能的作用及其機制。 [方法] 選用20g左右的BL/C57小鼠50只，分為模型組和對照組，各25只。模型組腹腔注射D-半乳糖150mg/kg，每天一次，連續(xù)90d，制備老年癡呆動物模型。對照組注射等量的0.9％的生理鹽水。
2、 通過Y-型迷宮比較兩組小鼠的學習記憶能力，第一天檢測小鼠學習能力，間隔24小時后檢測小鼠記憶能力。 行為學實驗結束后，每組取10只小鼠，測定蛋白質含量和AChE、ChAT、MAO、MDA、GSH-PX、SOD、Na<'+>K<'+>-ATP酶，按試劑盒說明書所述步驟操作。 各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉60mg/kg麻醉，用多聚甲醛進行心臟灌流，，取腦感覺運動區(qū)皮層，置于戊二醛中，透射電鏡觀察。 熒光顯微鏡配合免疫
3、組織化學觀察小鼠腦的矢狀冷凍切片海馬區(qū)域甘丙肽的表達，熒光顯微鏡檢測照相。 Realkime-PCR檢測小鼠腦區(qū)前額葉、中腦導水管周圍灰質中甘丙肽及其受體1、2、3表達狀況。 [結果] (1)行為學檢測結果說明模型小鼠的學習記憶能力明顯低于對照小鼠． (2)生化指標檢測出模型組AChE、ChAT、GSH-PX、SOD、Na<'+>K<'+>-ATP酶活性明顯降低，MAO活性上升，MDA含量明顯上升。
4、 (3)電鏡病理切片顯示模型組的細胞核明顯萎縮；線粒體嵴消失，或產(chǎn)生空泡。對照組細胞核正常，線粒體嵴清晰。 (4)免疫熒光檢測海馬區(qū)域甘丙肽含量表達差異，模型組甘丙肽表達明顯高于對照組。 (5)Realtime-PCR檢測出模型組前額葉、中腦導水管周圍灰質區(qū)域甘丙肽及其受體1、2、3的mRNA含量高于對照組。 [結論] (1)模型建立比較成功，為實驗提供可靠的前提。 (2) 老年癡呆小鼠氧化還原
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