MicroRNAs在冠心病血瘀證中的分子機制研究.pdf

1、目的:MicroRNAs(miRNAs)具有調控細胞分化、增殖、凋亡的功能，與心血管疾病密切相關。本研究使用TaqMan低密度芯片(TLDA)從冠心病血瘀證24h大鼠模型心臟組織中篩選差異表達的miRNAs，采用生物信息學分析的手段對差異表達的miRNAs進行生物信息學分析，并構建miRNAs與Gene、Ontology(GO)、Pathway間的相互調控網絡。分析結果發(fā)現(xiàn)，凋亡通路僅被microRNA-384-5p(miR-384-5

2、p)調控。因此，本研究旨在確定miR-384-5p在大鼠冠心病血瘀證中的作用及機制。
　　 方法:1.構建冠心病血瘀證24h大鼠模型，通過基因芯片技術篩選出差異表達的miRNAs;2.采用生物信息學分析的手段，對差異表達的miRNAs進行Gene、GO、Pathway等生物信息學分析，并構建miRNA-Gene-network、miRNA-GO-network、miRNA-Pathway-network及Pathway-Path

3、way-network;3.采用qRT-PCR手段對凋亡通路相關的具有顯著意義的靶基因(PIK3 CD，PPP3CA，PPP3CB，PPP3R1，CASP3及IL1A)進行驗證;4.構建過表達miR-384-5p及miR-384-5p抑制劑的H9c2細胞模型，通過MTT、Western Blot等技術在細胞水平上確定miR-384-5p對H9c2細胞凋亡的影響;5.通過雙熒光素酶報告基因分析確定miR-384-5p的靶基因;6.構建過表

4、達miR-384-5p及miR-384-5p抑制劑的H9c2細胞模型，通過Western Blot技術在細胞水平上確定miR-384-5p對其靶基因的影響。
　　 結果:1.基因芯片篩選結果顯示，冠心病血瘀證大鼠的心臟組織中16個miRNAs的表達有顯著性變化，其中12個上調，4個下調;2.生物信息學手段構建了miRNA-Gene-network、miRNA-GO-network、miRNA-Pathway-network及Pa

5、thway-Pathway-network;3.qRT-PCR進一步驗證了PIK3CD，PPP3CA，PPP3CB，PPP3R1, CASP3及IL1A的表達，發(fā)現(xiàn)PIK3CD，PPP3CA，PPP3R1，CASP3及ILlA的表達均顯著上調，與信息分析結果相符合，PIK3CB表達下調，其信息分析結果為假陽性;4.MiR-384-5p可以上調H9c2細胞cleaved caspase3的表達，相反miR-384-5p抑制劑可以下調其表達

6、，揭示了miR-384-5p可以調節(jié)凋亡通路;5.MiR-384-5p抑制H9c2細胞活力，而miR-384-5p抑制劑可以促進H9c2細胞活力，說明miR-384-5p的表達下調可以提高H9c2細胞活力;6.MiR-384-5p抑制劑促使H9c2細胞PIK3CD蛋白表達顯著上調;7.無論是在模型大鼠心臟組織還是缺氧的H9c2細胞中，miR-384-5p的表達水平均顯著下調，并且PIK3CD蛋白的表達水平均顯著上調;8.雙熒光素酶報告基