敲除DAPK1死亡結(jié)構(gòu)域?qū)θ毖阅X卒中神經(jīng)元保護作用研究.pdf

1、背景：
　　死亡相關(guān)蛋白激酶(DAPkinase,DAPK)是一類新的鈣離子/鈣調(diào)蛋白依賴激酶。最初，科學(xué)家主要研究它在腫瘤的發(fā)生發(fā)展與腫瘤轉(zhuǎn)移方面的作用。目前有研究證實DAPK1同時也參與缺血性腦中風(fēng)時的繼發(fā)性神經(jīng)元死亡。腦卒中是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病及多發(fā)病，死亡率和致殘率很高，往往給患者帶來諸多不良后果。因此對腦卒中發(fā)病機制的研究顯得尤其重要。DAPK1蛋白質(zhì)主要由6個部位組成，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)在缺血性腦卒中誘導(dǎo)神經(jīng)細胞死亡起主要作用的

2、是DAPK1的死亡結(jié)構(gòu)域(Death Domain)，該區(qū)可以與多種蛋白結(jié)合，引起細胞死亡，而目前還沒有報告關(guān)于在小鼠整體水平上敲除DAPK1死亡結(jié)構(gòu)域的研究。
　　目的:
　　1.論證敲除DAPK1-DD對缺血性腦卒中神經(jīng)元的保護作用
　　2.探討敲除DAPK1-DD對小鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響
　　材料與方法:
　　首先，為敲除DAPK1-DD，我們運用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在DAPK1的第25個內(nèi)含子和第27個啟動子

3、的下游插入LoxP位點制造flox小鼠，然后讓其與CaMKIIα-Cre小鼠雜交，在小鼠80天左右用他莫昔芬誘導(dǎo)cre的表達，達到敲除DAPK1-DD的目的。運用免疫組化的方法驗證cre的表達。敲除DAPK1-DD之后我們將進行水迷宮測試檢測小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。為論證敲除DAPK1-DD對腦缺血有保護作用，我們對腦缺血模型(MCAO)小鼠進行了TTC染色和核磁共振成像(MRI)，在體外實驗中，我們在原代培養(yǎng)的神經(jīng)細胞上進行糖氧剝奪實驗

4、(OGD)后再對其進行Tunel染色。
　　結(jié)果:
　　1.成功構(gòu)建DAPK1-DD敲除小鼠模型
　　2.部分敲除DAPK1-DD對小鼠的生長發(fā)育及自主行為沒有影響
　　3.部分敲除DAPK1-DD對小鼠學(xué)習(xí)記憶沒有影響
　　4.整體水平上，敲除部分DAPK1-DD對腦缺血無保護作用
　　5.原代神經(jīng)元模型，敲除DAPK1-DD對神經(jīng)元有保護作用
　　結(jié)論:
　　DAPK1在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中