環(huán)維黃楊星D對(duì)阿霉素心臟毒性的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、阿霉素(Doxorubicin，DOX)是一種臨床常用的廣譜、高效抗腫瘤藥物，廣泛用于白血病、肺癌和乳腺癌等實(shí)體腫瘤的治療，因具有明顯的心臟毒副作用而限制其臨床應(yīng)用。目前尚無(wú)較理想的預(yù)防和治療DOX心臟毒性的藥物。環(huán)維黃楊星D(Cyclovirobuxine D，Cvb-D)系提取自傳統(tǒng)中藥小葉黃楊的一種生物堿單體，對(duì)于心律失常、冠心病、心力衰竭等心血管疾病具有良好的防治效果。本研究旨在觀察Cvb-D對(duì)DOX心臟毒性的保護(hù)作用，并探討其

2、可能的作用機(jī)制，為DOX心臟毒性的防治提供新思路和方法。
　　本研究對(duì)C57小鼠采用單次腹腔注射給藥建立DOX心臟損傷模型，隨機(jī)將動(dòng)物分為對(duì)照組、Cvb-D組、DOX組以及Cvb-D+DOX組。灌胃給予Cvb-D(1 mg/kg)預(yù)處理4天，第5天單次腹腔注射DOX(15mg/kg)。DOX給藥后每日測(cè)量體重。DOX給藥4天后采用無(wú)創(chuàng)超聲心動(dòng)圖技術(shù)評(píng)價(jià)心功能;心肌組織切片進(jìn)行常規(guī)HE染色和心肌纖維化Masson's染色，光鏡下觀察

3、心肌組織形態(tài)學(xué)改變;采集小鼠血液樣本，測(cè)定血清中肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)水平，評(píng)價(jià)Cvb-D對(duì)DOX致機(jī)體毒性損傷的特征;采用黃嘌呤氧化法測(cè)定心肌組織中超氧陰離子（O2·-）的水平，應(yīng)用Griss法檢測(cè)心肌組織一氧化氮(NO)的含量，評(píng)價(jià)Cvb-D對(duì)DOX引起的小鼠心肌氧化狀態(tài)的影響;采用TBARS和DNPH比色法檢測(cè)心肌組織脂質(zhì)過(guò)氧化和蛋白羰基化水平，評(píng)價(jià)Cvb-D對(duì)DOX引起的小鼠心肌氧化損傷的影響;應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法

4、測(cè)定錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的活性，并采用DNTB的循環(huán)反應(yīng)原理檢測(cè)心肌組織中還原/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)的比值，評(píng)價(jià)Cvb-D對(duì)DOX引起的心肌抗氧化系統(tǒng)改變的影響;為了評(píng)價(jià)線粒體途徑在Cvb-D對(duì)DOX誘導(dǎo)小鼠心肌細(xì)胞凋亡中的影響，采用TUNEL法檢測(cè)心肌組織切片中的凋亡細(xì)胞，鏡下計(jì)數(shù)凋亡指數(shù);測(cè)定心肌組織中Caspase-3的活性，采用蛋白印跡方法(Western blot)測(cè)定組織中Caspase-3、Bcl

5、-2和Bax蛋白的表達(dá)以及細(xì)胞漿/線粒體中細(xì)胞色素C(Cytochrome C)的分布;檢測(cè)心肌組織中PGC-1α、Nrf-1蛋白的表達(dá)，并利用qPCR測(cè)定線粒體基因(mtDNA)拷貝數(shù)，以此評(píng)價(jià)Cvb-D對(duì)DOX誘導(dǎo)小鼠心肌組織線粒體損傷的影響。
　　研究結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，Cvb-D可明顯改善DOX誘導(dǎo)的心功能改變，降低DOX引起的左心室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)和左心室收縮末期內(nèi)徑(LVEDS)的增加、提高左室短軸縮短分

6、數(shù)(FS)和左室射血分?jǐn)?shù)(EF)等參數(shù);抑制DOX引起的體重和心臟濕重比率下降;減輕心肌腫脹、空泡化等組織形態(tài)學(xué)改變以及心肌纖維化改變;降低DOX引起的血清中LDH及CK升高;Cvb-D能夠減輕DOX致心肌組織氧化損傷程度，包括降低心肌組織中MDA的含量和蛋白羰基化損傷程度，增加GSH/GSSG水平，并降低O2·-和NO水平;Cvb-D可明顯抑制DOX誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡增加，提高心肌組織Caspase-3表達(dá)及活性以及Bcl-2/Bax

7、蛋白表達(dá)的比值;Cvb-D能夠提高線粒體中細(xì)胞色素C的表達(dá);提高線粒體基因拷貝數(shù);并且能夠促進(jìn)與線粒體功能密切相關(guān)的PCG-1α、Nrf-1基因表達(dá)。
　　以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Cvb-D對(duì)DOX心臟毒性具有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與Cvb-D抗氧化作用有關(guān)，自由基的清除可能在此過(guò)程中發(fā)揮重要的作用，同時(shí)Cvb-D能夠緩解DOX引起的心肌細(xì)胞線粒體損傷，抑制由DOX誘導(dǎo)的Caspase-3活化而產(chǎn)生的心肌細(xì)胞凋亡，推測(cè)Cvb-D對(duì)D