血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子可溶性受體(sflT-1)與子宮內(nèi)膜異位癥血管形成機(jī)制的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　 通過(guò)測(cè)定sflt-1、VEGF在異位子宮內(nèi)膜、在位子宮內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，并計(jì)算VEGF的活性指數(shù)(VEGF/sflt-1)，探討sflt-1對(duì)VEGF及血管形成的影響，了解血管生成抑制因子在EMs血管形成機(jī)制中的作用，為EMs的臨床診斷和抗血管治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 選擇2011年6月-2012年6月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院因子宮內(nèi)膜異位癥行腹腔鏡手術(shù)治療的患者，術(shù)后病理

2、證實(shí)為EMS的48例患者，根據(jù)美國(guó)生育協(xié)會(huì)(R-AFs)分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ-Ⅱ期15例，Ⅲ-Ⅳ期33例，年齡20-48歲，其中取得異位病灶48份，在位內(nèi)膜32份。同時(shí)同期選擇因卵巢良性腫瘤、宮頸病變、漿膜下肌瘤、輸卵管疾病等非內(nèi)異癥原因接受子宮切除的患者以及接受宮腔鏡檢查的非EMS患者30例，年齡32-50歲，（增生期18例，分泌期12例）術(shù)后病理證實(shí)為正常的子宮內(nèi)膜。兩組患者均月經(jīng)規(guī)律(28-32天)，未合并其它內(nèi)外科疾病，術(shù)前6個(gè)月未接受

3、過(guò)激素類(lèi)藥物治療，6個(gè)月內(nèi)無(wú)妊娠及哺乳史，各組間年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，所有入選病例均經(jīng)病理明確診斷。
　　 ①采用免疫組化S-P法分別測(cè)定子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜中VEGF、sflt-1蛋白的表達(dá)，并用CD105進(jìn)行標(biāo)記對(duì)微血管密度(MVD)定量檢測(cè)，用Image-ProPlus6.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析;②采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定上述各組VEGFmRNA、sFlt-1mRNA表達(dá)水平;采用比較閾值法（2

4、-△△ct法）對(duì)目的基因進(jìn)行相對(duì)定量分析，并計(jì)算VEGF活性指數(shù)。
　　 結(jié)果:
　　 1、免疫組化結(jié)果顯示:
　　 ①VEGF和sflt-1主要表達(dá)于三組內(nèi)膜的腺上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿和胞膜上，腺上皮細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)于間質(zhì)細(xì)胞;CD105主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿和胞膜上。
　　 ②VEGF在在位內(nèi)膜的表達(dá)明顯高于對(duì)照組和異位內(nèi)膜(P＜0.01);sflt-1在對(duì)照組的表達(dá)明顯高于在位內(nèi)膜和

5、異位內(nèi)膜(P＜0.01);MVD在異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和對(duì)照組中依次增高，且兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 ③對(duì)照組中，VEGF的表達(dá)在分泌期明顯高于增生期（P＜0.01），而sflt-1的表達(dá)在分泌期卻明顯低于增生期(P＜0.01)，MVD沒(méi)有顯著的周期性變化;在位內(nèi)膜組中，VEGF的表達(dá)沒(méi)有顯著周期性變化（P＞0.05），sflt-1在在位內(nèi)膜分泌期明顯低于增生期(P＜0.01)，MVD在分泌期顯著高于增生期（P

6、＜0.05）。
　　 ④在相關(guān)性分析中，在位內(nèi)膜組sflt-1與MVD呈負(fù)相關(guān)(r=-0.638，P＜0.05);異位內(nèi)膜組sflt-1與MVD無(wú)明顯相關(guān)性(r=-0.152P＞0.05);對(duì)照組VEGF、sflt-1與MVD均無(wú)明顯相關(guān)性。
　　 2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示:
　　 ①VEGFmRNA、sflt-1mRNA實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2均達(dá)到0.99，說(shuō)明線性相關(guān)度很高，且擴(kuò)增效率均在9

7、0％以上，各溶解曲線呈單峰分布說(shuō)明PCR產(chǎn)物無(wú)非特異性的擴(kuò)增(Fig.4-6)，擴(kuò)增曲線中出現(xiàn)峰值(Fig.7-9)，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)引物設(shè)計(jì)合理且底物中存在目的基因。
　　 ②sflt-1mRNA在對(duì)照組、在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜組的表達(dá)量分別為3.898±1.287、3.278±0.997和1.866±0.916，兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;VEGFmRNA在對(duì)照組、在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜組的表達(dá)量分別為1.961±1.130、2.773±0.8

8、54和1.109±0.715，兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;VEGF活性指數(shù)在對(duì)照組、在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜組數(shù)值分別為0.698±0.461、0.918±0.375和0.572±0.397，在位內(nèi)膜的數(shù)值明顯高于異位內(nèi)膜和對(duì)照組(P＜0.05)，異位內(nèi)膜組高于對(duì)照組，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（Table3）。
　　 ③在位內(nèi)膜中，VEGFmRNA、sflt-1mRNA和VEGF活性指數(shù)都沒(méi)有周期性變化;對(duì)照組子宮內(nèi)膜中，VEGF

9、mRNA在增生期和分泌期的表達(dá)量分別為1.425±0.800和2.766±1.096(P＜0.01)，VEGF活性指數(shù)在增生期和分泌期分別為0.350±0.215和0.905±0.377(P＜0.01)，而對(duì)照組中sflt-1mRNA在增生期和分泌期的表達(dá)分別為4.386±1.400和3.165±0.600，即增生期的表達(dá)明顯高于分泌期(P＜0.01)(Table4)。
　　 ④VEGFmRNA的表達(dá)量在Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期分別為

10、1.447±0.749和0.956±0.655，Ⅰ-Ⅱ期的表達(dá)量明顯高于Ⅲ-Ⅳ期(P＜0.05);sflt-1mRNA在Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期的表達(dá)量分別為2.517±0.952和1.570±0.740，Ⅰ-Ⅱ期表達(dá)明顯高于Ⅲ-Ⅳ期(P＜0.01)。VEGF活性指數(shù)在Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期的表達(dá)量分別為0.773±0.649和0.651±0.351，Ⅰ-Ⅱ期高于Ⅲ-Ⅳ期，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、