Luminex液相芯片同時檢測小鼠3種病毒方法的建立.pdf

1、仙臺病毒(Sendai virus，SeV)屬副黏病毒科，副黏病毒屬，為單股負鏈RNA病毒。SeV唯一的自然宿主是嚙齒類動物，SeV為清潔級和SPF（Specific pathogen free，SPF）級實驗小鼠的必須檢測項目。小鼠肝炎病毒(Mouse hepatitis virus，MHV)是冠狀病毒科，冠狀病毒屬的正鏈RNA病毒，基因組不分節(jié)段。MHV是清潔級小鼠必檢項目。呼腸孤病毒3型(Reovirus type3，Reo-3)

2、屬于呼腸孤病毒科，正呼腸孤病毒屬，是雙股RNA病毒。Reo-3為SPF級實驗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠的必檢項目。實驗動物一旦上述感染病毒，將干擾實驗結果，影響科學研究的準確性。
　　目前，實驗室診斷主要運用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等血清學方法，也可通過病毒分離方法檢測。ELISA測抗體是檢測病毒最常用的方法，但抗體在感染1-2周后才能出現(xiàn)，因此ELISA不適合感染早期的診斷。聚合酶鏈式反應(polymerase chain r

3、eaction，PCR)和RT-PCR是重要的分子生物學檢測方法，具有簡便快速的特點，已廣泛應用于病毒學、細菌學、寄生蟲學檢測中。
　　Luminex液相芯片技術是20世紀90年代興起的新型檢測技術，它集合了激光技術、流式細胞技術以及微球數(shù)字信號處理技術。與傳統(tǒng)的臨床檢測方法相比，其主要優(yōu)點在于高通量、高敏感、重復性高、檢測范圍廣、反應速度快，僅需微量樣品即可進行檢測等。Luminex具有兩大核心技術:xMAP(R)技術和xTAG

4、(R)技術。xMAP(R)技術檢測原理為抗原-抗體反應，可用于蛋白質和核酸的檢測;xTAG(R)技術能夠測定若干基因組形式，如基因表達分析，微RNA分析，單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）分析，特定序列的檢測等。
　　目的:為建立一種能快速檢測小鼠SeV、 MHV、Reo-3等3種病毒的方法。
　　方法:聯(lián)合使用RT-PCR技術和Luminex液相基因芯片技術，針對SeV、

5、 MHV、Reo-3的保守區(qū)域分別設計引物，通過聚合酶鏈式反應擴增獲得大小為263bp、152bp和180bp的目的片段;對引物進行修飾，上游引物分別連接一段特定的TAG序列（與微球上的anti-TAG反向互補），下游引物用生物素標記。利用修飾過的引物重新進行RT-PCR反應，產物與微球進行雜交，建立小鼠3種病毒的液相基因芯片方法;并評價該方法的特異性、靈敏度。分別利用Luminex液相基因芯片和ELISA對送檢小鼠進行檢測，對比兩種方