Pokemon在HepG2細(xì)胞中對(duì)CDK2基因表達(dá)的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　研究原癌基因 pokemon在 HepG2細(xì)胞中對(duì)細(xì)胞周期蛋白依耐性激酶 CDK2基因表達(dá)的調(diào)控作用。
　　方法：
　　1.構(gòu)建不同長(zhǎng)度的CDK2啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因載體，分別轉(zhuǎn)染到HepG-2中，通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)法檢測(cè)pokemon對(duì)CDK2啟動(dòng)子活性的影響。
　　2.染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)pokemon蛋白與CDK2啟動(dòng)子相互作用的關(guān)系。
　　3.點(diǎn)突變技術(shù)確定pokem

2、on與CDK2啟動(dòng)子結(jié)合的可能位點(diǎn)。
　　4.Real-Time PCR技術(shù)檢測(cè) pokemon對(duì) CDK2 mRNA表達(dá)的影響。
　　5.Westernblot技術(shù)檢測(cè)pokemon對(duì)CDK2蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1．雙熒光素酶報(bào)告基因顯示： CDK2基因ATG上游528bp為CDK2啟動(dòng)子的核心活性區(qū)域，pokemon在HepG2細(xì)胞抑制了CDK2啟動(dòng)子活性。
　　2．染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)顯

3、示：細(xì)胞內(nèi) pokemon可通過直接結(jié)合 CDK2啟動(dòng)子來調(diào)控CDK2的表達(dá)。
　　3.點(diǎn)突變技術(shù)顯示：-259 bp至-249bp可能是pokemon與CDK2啟動(dòng)子結(jié)合的序列。
　　4. RealTime-PCR顯示：pokemon可下調(diào)HepG2細(xì)胞中CDK2 mRNA表達(dá)水平。
　　5.Westernblot顯示：pokemon可降低HepG2細(xì)胞中CDK2蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　1.在He