粉紋夜蛾新細胞系的建立及其特性研究.pdf

1、昆蟲細胞作為生物農藥和基因表達的新型生物反應器而備受青睞。因此，不斷發(fā)掘新昆蟲細胞系，為科學研究和生產提供新資源，是目前研究的熱點。 本研究以粉紋夜蛾受精卵為材料，建立多株粉紋夜蛾胚胎細胞系，從中篩選了一株懸浮的群體倍增時間短的，高產昆蟲桿狀病毒和外源蛋白的昆蟲細胞系，命名為QB-Tn9-4s。 QB-Tn9-4s細胞在輔以10％小牛血清的TNM-FH培養(yǎng)基中原代培養(yǎng)80多天開始分裂細胞。開始細胞生長慢，并且不穩(wěn)定，10

2、天左右傳代一次，細胞穩(wěn)定后3～4天傳代一次，現(xiàn)已傳代60多代。 QB-Tn9-4s細胞形態(tài)70％為紡錘形，大小為18.22x57.70μm，30％為圓形，半徑22.19μM。該細胞原代培養(yǎng)時是貼壁生長的，開始傳代培養(yǎng)時貼壁性較弱，細胞穩(wěn)定傳代培養(yǎng)后呈懸浮生長且增殖很快，群體倍增時間為25.4小時，最大生長密度可達2.0×106cells/mL。 對苜蓿丫紋夜蛾核型多角體病毒(AcMNPV)、甘藍夜蛾核型多角體病毒(MbN

3、PV)、粘蟲核型多角體病毒(MsNPV)等病毒敏感。接種AcMNPV病毒，96小時病毒感染率達92％，多角體產量平均為(107.2±4.5)OBs/cell，是-株高產桿狀病毒的細胞系。 通過隨機增DNA-聚合酶鏈式反應試驗，用引物OPU-09，OPU-10，NO.2，T.ni鑒定，細胞系QB-Tn9-4s的基因組DNA與粉紋夜蛾卵基因組DNA，Tn5Bl-4細胞基因組DNA的條帶一致，與Sf-9細胞基因組DNA條帶明顯不同，說

4、明細胞系QB-Tn9-4s是-株來源于粉紋夜蛾胚胎細胞的細胞系，并且該細胞與實驗室保存的其它細胞沒有交叉污染。 QB-Tn9-4s是一株高表達重組蛋白的昆蟲細胞系。用重組病毒AcMNPV-β-gal侵染細胞，QB-Tn9-4s細胞內β-半乳糖苷酶的產量與Tn5Bl-4相當，而遠高于Sf-9，第8天達到最大表達量(2.534±0.034)×104IU/mL是Sf-9的1.98倍。隨著時間的延長，QB-Tng-4s培養(yǎng)基中酶量逐漸增