黃芩苷對熱應激條件下小鼠胚胎HSP70及凋亡相關因子表達的影響.pdf

1、在受熱及其他不利理化因素的刺激下，多數(shù)生物細胞會產生熱休克蛋白（HSPs），其中 HSP70在生物細胞中含量最高，可誘導性最強，對細胞具有顯著抗熱作用。細胞凋亡是由基因控制的細胞自主的程序性死亡，其中線粒體在細胞凋亡中起著無法替代的作用。Bcl-2家族對線粒體凋亡通路具有顯著的調控作用，其中Bcl-2具有抗凋亡作用，而Bax能夠拮抗Bcl-2，起到促凋亡的作用。Caspase被認為是一切凋亡信號轉導的共同通路，在 Caspase家族中，

2、Caspase-3是最重要的凋亡執(zhí)行者。黃芩苷是從黃芩的干燥根中提取的主要成分之一，其解熱作用顯著。目前有關黃芩苷在胚胎上的的抗熱作用機制研究甚少，而黃芩苷誘導 HSP70表達拮抗熱應激條件下的胚胎凋亡可能是黃芩苷抗熱應激的機制之一。本研究將檢測不同濃度的黃芩苷對體外胚胎發(fā)育的影響和對熱應激誘導的小鼠胚胎HSP70、Bcl-2、Bax和Caspase-3表達的影響，以探索黃芩苷保護熱損傷胚胎的部分機理。試驗方法及結果如下：
　　在

3、CZB胚胎培養(yǎng)液中添加終濃度分別為2μg/mL、4μg/mL和8μg/mL的黃芩苷，將體外獲取的原核期胚胎放入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，記錄胚胎各階段發(fā)育率及囊胚期細胞總數(shù)。隨后對發(fā)育至囊胚的胚胎進行41℃1 h的熱應激處理，試驗分為37℃和41℃對照組及41℃黃芩苷組（2μg/mL、4μg/mL和8μg/mL），恢復3 h，提取總RNA用巢式-PCR檢測HSP70、Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA相對表達量；用免疫熒光法檢測HSP

4、70、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的分布及相對表達量。
　　試驗結果顯示：在CZB胚胎培養(yǎng)液中添加4μg/mL黃芩苷時，其各階段胚胎發(fā)育率及囊胚細胞總數(shù)均顯著高于對照組（P<0.05）。41℃對照組和黃芩苷各組均能顯著誘導小鼠胚胎的HSP70蛋白的表達（P<0.05），HSP70 mRNA表達量除4μg/mL黃芩苷組與41℃對照組差異顯著外（P<0.05），其余各組與41℃對照組相比均不顯著（P>0.05）。與41℃

5、對照組相比，黃芩苷組小鼠胚胎中 Bcl-2 mRNA和蛋白的表達量均顯著升高（P<0.05），Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表達量均顯著降低（P<0.05）。
　　以上結果說明：在CZB胚胎培養(yǎng)液中添加黃芩苷（2~8μg/mL）能促進體外小鼠胚胎發(fā)育及細胞增殖，最佳濃度為4μg/mL。41℃熱應激可通過線粒體凋亡通路誘導小鼠胚胎發(fā)生凋亡，并且可提高HSP70蛋白的表達。本試驗條件下，黃芩苷（2~8μg/mL）能夠上調熱