長鏈非編碼RNA TUC40-在胚胎心臟發(fā)育中作用的初步研究.pdf

1、目的:探索Pbx1/TUC40-在胚胎心臟發(fā)育中的作用。
　　方法:前期應用長鏈非編碼RNA微陣列芯片篩查發(fā)現(xiàn)，在室間隔缺損人工流產(chǎn)的胚胎心臟組織中，超保守片段uc.40-異常高表達。采用鏈特異性逆轉(zhuǎn)錄實時定量聚合酶鏈反應確認uc.40-的轉(zhuǎn)錄本transcribed uc.40-(TUC40-)。應用生物信息學方法分析uc.40-，TUC40-及Pbx1的基本信息。進一步應用逆轉(zhuǎn)錄實時定量聚合酶鏈反應，分析Pbx1/TUC40-

2、在小鼠胚胎發(fā)育過程中的表達譜;在P19細胞水平，采用質(zhì)粒過表達uc.40-，通過檢測心肌細胞標志物來判斷過表達對分化的影響，應用流式細胞法（細胞周期）以及CCK8法檢測細胞增殖，應用流式細胞法（細胞凋亡）以及caspase-3法檢測細胞凋亡，應用實時定量聚合酶鏈反應檢測Pbx1在細胞誘導過程中的變化趨勢。
　　結(jié)果:我們應用鏈特異性逆轉(zhuǎn)錄實時定量聚合酶鏈反應確認了uc.40-的轉(zhuǎn)錄本——TUC40-。生物信息學分析顯示TUC40-

3、為反義長鏈非編碼RNA，其正義基因Pbx1已被證實在室間隔胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用。在小鼠胚胎發(fā)育過程中，Pbx1/TUC40-的表達具有時空特異性，在胚胎心臟發(fā)育中，它們的表達有反向趨勢。在細胞模型中，uc.40-的過表達導致P19細胞分化障礙，阻礙P19細胞的增殖，使其易于發(fā)生凋亡，且導致Pbx1在誘導分化中喪失了上升趨勢。
　　結(jié)論: uc.40-的過表達可能是導致胚胎心臟發(fā)育畸形的原因之一。uc.40-是否通過Pbx1發(fā)揮作