非洛地平和厄貝沙坦抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制研究.pdf

1、第一部分、非洛地平抑制高膽固醇飲食ApoE KO小鼠動(dòng)脈粥樣硬化形成機(jī)制的研究。 目的：氧化應(yīng)激和炎癥參與了動(dòng)脈粥樣硬化（As）的發(fā)生與發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)部分鈣通道阻斷劑（CCB）有抗As的作用，然而其具體機(jī)制尚未明了。本研究旨在探討非洛地平對(duì)載脂蛋白E基因敲除（ApoE KO）小鼠As斑塊發(fā)生發(fā)展的影響及其分子機(jī)制。 方法：ApoE KO小鼠隨機(jī)分為普食組（ND組）、高膽固醇飲食組（HCD組）、高膽固醇飲食+非洛地平組（H

2、CD+Fel組），每組15只，分別予蒸餾水、蒸餾水、非洛地平5mg/kg/d灌胃12周，內(nèi)眥取血檢測(cè)血清總膽固醇、甘油三酯水平；冰凍切片光鏡下定位主動(dòng)脈根部，油紅O染色計(jì)算斑塊面積；Western Blot檢測(cè)胞漿胞核核因子-кB（NF-кB）p50，p65和I-кB的表達(dá)；實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blot方法檢測(cè)主動(dòng)脈煙酰胺腺嘌呤二核苷酸[NAD(P)H]氧化酶亞基p47phox和Rac-1及炎癥因子腫瘤壞死因子-α（TNF-

3、α）、單核細(xì)胞趨化因子-1（MCP-1）和血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）的表達(dá)。 結(jié)果： （1）高膽固醇飲食的ApoE KO小鼠血脂水平明顯高于普食的ApoE KO小鼠。 （2）無(wú)論普食還是高膽固醇飲食的ApoE KO小鼠均有明顯的斑塊形成；且HCD組斑塊面積明顯高于ND組；與HCD組相比，HCD+Fel組斑塊面積明顯減小。 （3）非洛地平可以降低斑塊內(nèi)NF-κB的激活。 （4）非洛地平降低

4、斑塊內(nèi)NAD(P)H氧化酶亞基p47phox和Rac-1以及炎癥因子TNF-α、MCP-1、VCAM-1的表達(dá)。 結(jié)論：CCB非洛地平可以抑制As進(jìn)展，其機(jī)制可能為通過(guò)抑制NF-κB的激活，阻斷氧化應(yīng)激和炎癥信號(hào)通路激活后級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而降低炎癥因子的表達(dá)，抑制炎癥反應(yīng)，阻止了As進(jìn)一步發(fā)展。 第二部分、厄貝沙坦抑制高膽固醇飲食ApoE KO小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的機(jī)制研究。 目的：As是一種慢性炎癥性疾病，腎素

5、-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）在其發(fā)生發(fā)展中扮演重要的角色。研究發(fā)現(xiàn)血管緊張素Ⅱ受體1拮抗劑（ARB）有抗As的作用，然而其具體機(jī)制尚未明了。本研究旨在探討ARB厄貝沙坦對(duì)ApoE KO小鼠As斑塊發(fā)生發(fā)展的影響及其分子機(jī)制。 方法：ApoE KO小鼠隨機(jī)分為普食組（ND組）、高膽固醇飲食組（HCD組）、高膽固醇飲食+厄貝沙坦組（HCD+Irb組），每組15只，分別予蒸餾水、蒸餾水、厄貝沙坦10mg/kg/d灌胃12周。內(nèi)眥動(dòng)脈取血

6、檢測(cè)血清膽固醇和甘油三脂水平；冰凍切片光鏡下定位主動(dòng)脈根部，油紅O染色評(píng)估斑塊大??；Western blot方法檢測(cè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（ERK1/2）、Janus激酶2（JAK2）、信號(hào)傳導(dǎo)子和激活子3（STAT3）、I-кB和胞漿胞核NF-κB的表達(dá)，實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot方法檢測(cè)主動(dòng)脈NAD(P)H氧化酶亞基p47phox和Rac-1及炎癥因子TNF-α、MCP-1、白介素-6（IL-6）和V

7、CAM-1的表達(dá)。 結(jié)果： （1）高膽固醇飲食的ApoE KO小鼠血脂水平明顯高于普食的ApoE KO小鼠。 （2）無(wú)論普食還是高膽固醇飲食的ApoE KO小鼠均有明顯的斑塊形成；HCD組斑塊面積明顯高于ND組；與HCD組相比，HCD+Irb組斑塊面積明顯減小。 （3）厄貝沙坦可以降低信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白ERK1/2、JAK2、STAT3和NF-κB的激活。 （4）厄貝沙坦顯著降低p47phox和Ra

8、c-1以及炎癥因子TNF-α、IL-6、MCP-1和VCAM-1的表達(dá)。 結(jié)論：ARB厄貝沙坦有顯著的抑制As進(jìn)展作用，其機(jī)制可能為抑制NAD(P)H氧化酶生成，降低信號(hào)通路蛋白ERK1/2、JAK2、STAT3和NF-κB的激活，阻斷氧化應(yīng)激和炎癥信號(hào)通路，降低炎癥因子的表達(dá)，從而達(dá)到抑制As發(fā)生發(fā)展的目的。 第三部分低劑量非洛地平和厄貝沙坦聯(lián)合治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用與機(jī)制。 目的：探討低劑量CCB非洛地平和A

9、RB厄貝沙坦聯(lián)合使用對(duì)高膽固醇飲食ApoE KO小鼠As形成的影響及機(jī)制。 方法：ApoE KO小鼠隨機(jī)分為普食組（ND組）、高膽固醇飲食組（HCD組）、高膽固醇飲食+非洛地平+厄貝沙坦組（HCD+Fel+Irb組），每組15只，分別予蒸餾水、蒸餾水、非洛地平2.5mg/kg/d+厄貝沙坦5mg/kg/d灌胃12周。內(nèi)眥動(dòng)脈取血檢測(cè)血清膽固醇和甘油三脂水平；冰凍切片光鏡下定位主動(dòng)脈根部，油紅O染色評(píng)估斑塊大??；實(shí)時(shí)定量PCR和W

10、estern blot方法檢測(cè)主動(dòng)脈中NAD(P)H氧化酶亞基p47phox和Rac-1及炎癥因子TNF-α、IL-6、MCP-1和VCAM-1的表達(dá)。 結(jié)果： （1）高膽固醇飲食的ApoE KO小鼠血脂水平明顯高于普食的ApoE KO小鼠。 （2）無(wú)論普食還是高膽固醇飲食的ApoE KO小鼠均有明顯的斑塊形成；且HCD組斑塊面積明顯高于ND組；與HCD組相比，HCD+Fel+Irb組斑塊面積明顯減小。