Chlorin e6聲動(dòng)力聯(lián)合紫杉醇對(duì)人肺腺癌細(xì)胞SPCA-1生長(zhǎng)的影響.pdf

1、肺癌是腫瘤中威脅人類生命健康的頭號(hào)殺手，70％患者在診斷時(shí)已是局部晚期或有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。第三代化療藥物與鉑類的聯(lián)合化療是晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的標(biāo)準(zhǔn)一線治療，存在的問(wèn)題是療效到達(dá)平臺(tái)：有效率25％～35％，中位生存期8～10個(gè)月。以表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)及其細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)為靶點(diǎn)的肺癌靶向治療雖不良反應(yīng)小，但其有效性與EGFR基因突變有關(guān)，總體人群有效率低，且中位耐藥時(shí)間為6-10個(gè)月?；熍c抗血管生成等靶向藥物聯(lián)合治療亦僅延長(zhǎng)生

2、存1-3個(gè)月。因此，尋找高效、低毒的治療肺癌新方法，是醫(yī)學(xué)界面臨的重要問(wèn)題。
　　 聲動(dòng)力療法(Sonodynamic therapy，SDT)是在光動(dòng)力療法(Photodynamictherapy，PDT)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種腫瘤治療新理念、新方法。是通過(guò)將超聲聚焦于腫瘤的特定部位，化學(xué)激活與腫瘤具有親合性的聲敏劑分子，產(chǎn)生活性氧自由基，從而有針對(duì)性地殺傷腫瘤細(xì)胞[1，2]。由于超聲波較紅光選擇性聚焦且穿透力強(qiáng)，并且對(duì)周圍正常

3、組織損傷較小，因此，聲動(dòng)力療法的抗腫瘤效應(yīng)具有良好的應(yīng)用前景。鑒于多數(shù)光敏劑同時(shí)具聲動(dòng)力作用，目前聲動(dòng)力多采用光敏劑做聲敏劑[3]，聲動(dòng)力治療目前存在兩個(gè)問(wèn)題：一是光敏劑腫瘤特異性聚集低、正常組織清除慢及光毒副作用高等缺點(diǎn)，限制了SDT被批準(zhǔn)用于臨床，因此需發(fā)展新型聲敏劑；二是SDT如何與其他主要治療手段聯(lián)合進(jìn)一步提高療效。
　　 二氫卟吩e6(Chlorin e6)是一種結(jié)構(gòu)類似于血卟啉的葉綠素降解產(chǎn)物。1974年Yamamo

4、to，T等首次采用激光輻照Chlorin e6光動(dòng)力治療艾氏細(xì)胞瘤，殺傷作用明顯[4]。之后其光動(dòng)力抗腫瘤效應(yīng)經(jīng)大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)得到證實(shí)，且具低毒、腫瘤特異性聚集高、正常組織清除快、光毒副作用低的優(yōu)點(diǎn)[5-7]，是一個(gè)具有誘人前景的光敏劑，Chlorin e6已完成Ⅰ期臨床實(shí)驗(yàn)光動(dòng)力治療黑色素瘤皮膚轉(zhuǎn)移瘤[8]。鑒于多數(shù)光敏劑亦同時(shí)具聲動(dòng)力作用，本研究的第一個(gè)目的是通過(guò)觀察Chlorin e6聯(lián)合超聲波對(duì)人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)的作用

5、以明確其是否具聲敏劑聲動(dòng)力作用。晚期NSCLC一線治療以全身化療為主，紫杉醇(Paclitaxel)是一線治療晚期NSCLC的第三代化療藥，且鑒于既往大量的臨床前及臨床研究已證實(shí)其具放療增敏效應(yīng)[9]和光動(dòng)力增敏效應(yīng)[10，11]，本研究的第二個(gè)目的是探索紫杉醇對(duì)Chlorin e6聲動(dòng)力抑制人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)作用是否具增敏作用。
　　 第一部分 Chlorin e6聲動(dòng)力對(duì)人肺腺癌細(xì)胞SPCA-1生長(zhǎng)的作用
　

6、　 目的：觀察Chlorin e6聲動(dòng)力對(duì)人肺腺癌細(xì)胞SPCA-1的急性細(xì)胞毒作用。
　　 方法：采用四甲基偶氮唑鹽(3-[4，5-dimethylthiazol，-2-yl]-2，5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)顯色分光光度法檢測(cè)單純超聲和聲敏劑二氫卟吩e6(Chlorin e6，E6)對(duì)SPCA-1和正常人外周血單核細(xì)胞(normalperipheral mononuclear cel

7、l，PMNC)的細(xì)胞毒作用，并以此確定聲照參數(shù)(1.0w/cm2×60s)和Chlorin e6劑量(0.05 mg/mL～0.2 mg/mL)，觀察Chlorine6聲動(dòng)力效應(yīng)對(duì)SPCA-1細(xì)胞和PMNC細(xì)胞的急性殺傷作用，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，相關(guān)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，兩組之間比較采用t檢驗(yàn)；多組之間比較采用one-way ANOVA方差分析，而后不同組間比較采用LSD

8、檢驗(yàn)，P<0.05判定為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：1、超聲及Chlorine e6對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響1.0 MHz超聲(1.0～2.0)w/cm2×60s呈強(qiáng)度依賴性抑制SPCA-1和PMNC細(xì)胞生長(zhǎng)，超聲抑制50％SPCA-1和PMNC細(xì)胞生長(zhǎng)的強(qiáng)度分別為：1.45 W/cm2、1.44 W/cm2，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.185，P=0.857)。Chlorine e6(0.4～3.2)mg/mL呈濃度依賴性地抑制SPCA

9、-1和PMNC細(xì)胞生長(zhǎng)。Chlorine e6抑制SPCA-1和PMNC細(xì)胞生長(zhǎng)的IC50值分別為：0.79 mg/mL、0.97 mg/mL，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-1.611，P=0.138)。
　　 2、超聲與Chlorine e6聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 1.0 W/cm2單純超聲作用SPCA-1和PMNC細(xì)胞存活率分別為79.6％、78.0％，與正常對(duì)照組相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，SPCA-1和PMNC細(xì)胞間比

10、較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.419，P=0.684)。0.05 mg/mL、0.1 mg/mL和0.2 mg/mL三個(gè)不同濃度chlorine e6單純作用對(duì)SPCA-1和PMNC細(xì)胞生長(zhǎng)均無(wú)顯著作用(P>0.05); 1.0 W/cm2超聲聯(lián)合該三個(gè)不同濃度Chlorine e6作用SPCA-1細(xì)胞存活率分別為66.3％、52.9％和28.3％，PMNC細(xì)胞存活率分別為78.8％、80.4％和75.3％。與單純超聲和Chlorinee6相

11、比，超聲聯(lián)合Chlorine e6對(duì)SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，對(duì)PMNC細(xì)胞存活率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 3、倒置顯微鏡觀察超聲與Chlorine e6單獨(dú)及聯(lián)合作用對(duì)SPCA-1細(xì)胞存活的影響高倍鏡下，圓形、透亮、胞膜完整、胞漿豐富的細(xì)胞視為活細(xì)胞；多形、不透亮、胞膜破裂、胞漿流失的細(xì)胞視為死細(xì)胞。C組、U1.0。組、E0.2組、U1.0E0.2組SPCA-1細(xì)胞死亡率分別為1.

12、6％、21.5％、2.3％、69.8％。與單純1.0 W/cm2超聲的U1.0組和單純0.2 mg/mL Chlorine e6的E0.2組比，超聲聯(lián)合Chlorine e6的U1.0E0.2組SPCA-1細(xì)胞死亡率顯著升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：超聲聯(lián)合Chlorin e6聲動(dòng)力能急性殺傷人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞，且具特異性，Chlorine e6有望成為一個(gè)新型聲敏劑用于聲動(dòng)力治療非小細(xì)胞肺癌。
　　 第二部

13、分 紫杉醇對(duì)Chlorin e6聲動(dòng)力抑制人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)增敏作用
　　 目的：觀察Chlorin e6聲動(dòng)力對(duì)人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)的長(zhǎng)時(shí)抑制作用，并觀測(cè)紫杉醇對(duì)Chlorin e6聲動(dòng)力抑制人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)作用，旨在探討紫杉醇對(duì)二氫卟吩e6聲動(dòng)力是否具增敏作用。
　　 方法：采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)顯色分光光度法檢測(cè)單純超聲、聲敏劑Chlorin e6和紫杉醇對(duì)SPCA-1的細(xì)胞毒作

14、用，并以此確定聲照參數(shù)(1.0W/cm2×60s)、Chlorin e6劑量(0.025 mg/mL)和紫杉醇劑量(1×10-7M)，觀察Chlorine6聲動(dòng)力對(duì)人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)的長(zhǎng)時(shí)抑制作用，并觀測(cè)紫杉醇對(duì)Chlorin e6聲動(dòng)力抑制SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，相關(guān)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，多組之間比較采用one-wayANOVA方差分析，而后不同組間比較采用LS

15、D檢驗(yàn)，P<0.05判定為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：1、超聲、Chlorine e6及紫杉醇單獨(dú)作用對(duì)SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)的影響1.0 MHz超聲在1.0 W/cm2～2.0W/cm2強(qiáng)度范圍內(nèi)作用60s呈強(qiáng)度依賴性抑制SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)。Chlorine e6及紫杉醇分別在0.05mg/mL～1.6mg/mL及1 ×10-9M～1 × 10-6M濃度范圍內(nèi)呈濃度依賴性地抑制SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)。
　　 2、Ch

16、lorine e6聲動(dòng)力對(duì)SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 1.0 W/cm2超聲作用SPCA-1細(xì)胞存活率為78.8％，與正常對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)：0.025mg/mL濃度Chlorine e6作用SPCA-1細(xì)胞存活率為96.0％，與正常對(duì)照組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；1.0 W/cm2超聲聯(lián)合0.025 mg/mL濃度Chlorine e6作用SPCA-1細(xì)胞存活率為56.9％，與單純超聲和Chlorine

17、 e6相比，超聲聯(lián)合Chlorine e6聲動(dòng)力對(duì)SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用顯著增強(qiáng)(P<0.05)。
　　 3、紫杉醇對(duì)Chlorine e6聲動(dòng)力抑制SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)的影響1.0 W/cm2超聲聯(lián)合0.025 mg/mL濃度Chlorine e6作用SPCA-1細(xì)胞存活率為56.9％，與正常對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；1 × 10-7M濃度紫杉醇作用SPCA-1細(xì)胞存活率為54.6％，與正常對(duì)照組相比，

18、有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);Chlorine e6聲動(dòng)力(超聲：1.0 W/cm2；Chlorin e6：0.025 mg/mL)聯(lián)合1 × 10-7M濃度紫杉醇作用SPCA-1細(xì)胞存活率為8.5％，與Chlorine e6聲動(dòng)力和紫杉醇相比，Chlorine e6聲動(dòng)力聯(lián)合紫杉醇對(duì)SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用顯著加強(qiáng)(P<0.05)。
　　 結(jié)論：超聲聯(lián)合Chlorin e6聲動(dòng)力能長(zhǎng)時(shí)抑制人肺腺癌SPCA-1細(xì)胞生長(zhǎng)，且