人偏肺病毒感染后Toll樣受體的表達及功能.pdf

1、第一部分：
　　 目的：觀察人偏肺病毒感染人肺上皮細胞后Toll樣受體表達變化及其信號通路的功能,探討hMPV誘導氣道炎癥的部分機制。
　　 方法：hMPV感染體外培養(yǎng)的人肺上皮細胞株A549,檢測病毒在A549細胞中的生長曲線,并通過RT-PCR,real-time RT-PCR方法檢測細胞TLRs mRNA的表達,ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清干擾素-α及腫瘤壞死因子-α的表達。
　　 結果：(1)hMPV可在A

2、549細胞中復制,感染后3天達高峰105.2TCID50/mL。(2)RT-PCR結果提示:hMPV感染A549細胞6小時后大部分TLRs的表達均上調。(3)定量PCR結果提示:hMPV感染A549細胞后TLR3-4,TLR7-9的表達增高,且有時間依賴性,而紫外滅活的hMPV刺激細胞后TLRs表達無明顯變化。(4)ELISA結果提示hMPV感染后24小時,IFN-α及TNF-α的表達均明顯升高。
　　 結論：人偏肺病毒感染A5

3、49細胞后可上調Toll樣受體表達,其誘導的炎性反應與部分Toll樣受體介導的信號轉導途徑有關。
　　 第二部分：
　　 目的：探討人偏肺病毒感染BALB/c小鼠后肺組織Toll樣受體表達變化及PolyI:C對病毒復制的影響。
　　 方法：實驗分為hMPV感染組、PolyI:C+hMPV組、polyI:C+DMEM組、DMEM對照組,均于滴鼻后1、3、5、7、9、16天處死小鼠,取肺組織用于病毒滴度測定,病理檢查

4、,通過RT-PCR,real-time RT-PCR方法檢測小鼠肺組織TLRs mRNA的表達。
　　 結果：(1)PolyI:C+hMPV組與hMPV感染組相比,病毒在小鼠肺內復制水平明顯減低,僅在感染后第5天及第7天檢測到病毒；病理結果亦提示肺部炎癥明顯減輕。(2)RT-PCR結果提示:hMPV感染組小鼠與DMEM對照組相比,肺組織內大部分TLRs mRNA表達均升高。(3)real-time PCR結果提示:hMPV感染后