七葉皂苷鈉抗大鼠腦出血后腦水腫作用機(jī)制的研究.pdf

1、腦出血(ICH)是神經(jīng)科的常見(jiàn)病和多發(fā)病，其腦損傷的病理生理機(jī)制還不十分明確，目前仍沒(méi)有切實(shí)有效的治療方法，因此臨床上腦出血所導(dǎo)致的死亡率和致殘率仍很高。腦水腫是腦出血后再損傷，病情惡化的主要原因之一，可通過(guò)妨礙腦組織的血供和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的紊亂等加重神經(jīng)細(xì)胞損傷，嚴(yán)重地影響腦出血的預(yù)后。研究發(fā)現(xiàn)腦水腫與腦出血本身和血腦屏障(BBB)的破壞有關(guān)。血腦屏障緊密連接復(fù)合物和星形膠質(zhì)細(xì)胞是保持血腦屏障結(jié)構(gòu)和功能完整性的兩個(gè)重要因素。

2、七葉皂苷鈉(SA)是三萜皂苷的鈉鹽，是從中國(guó)藥典收藏的中藥婆羅子的干燥成熟果實(shí)中提取的。國(guó)外由德國(guó)藥典收藏的生藥歐馬栗的成熟果實(shí)中提取，具有糖皮質(zhì)激素抗?jié)B出、消腫及對(duì)抗磷酸組胺和緩激肽等炎性遞質(zhì)的作用，其作用為氫化可的松的七八倍，而且它還能恢復(fù)毛細(xì)血管的正常通透性。國(guó)內(nèi)有研究表明：β-七葉皂苷鈉注射液(10mg/kg/d)對(duì)大鼠急性脊髓損傷有明確的防治作用。本研究旨在通過(guò)觀(guān)察七葉皂苷鈉對(duì)大鼠腦出血后腦水腫發(fā)生時(shí)，緊密連接相關(guān)蛋白o(hù)ccl

3、udin和神經(jīng)膠質(zhì)原纖維蛋白(GFAP)陽(yáng)性細(xì)胞的作用，進(jìn)一步為臨床治療提供可靠的理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法： 1．建立大鼠腦出血模型。 2．測(cè)定大鼠腦組織含水量。 3．病理組織學(xué)觀(guān)察(H&E法)。 4．腦出血周?chē)M織超微結(jié)構(gòu)觀(guān)察。 5．免疫組化法檢測(cè)GFAP陽(yáng)性細(xì)胞。 6．Western blot法檢測(cè)occludin的表達(dá)。 7．圖像分析 Western blot結(jié)果

4、用Chemi Imager 5500 V2.03軟件對(duì)X光膠片進(jìn)行掃描，用Fluor Chem 2.0軟件測(cè)取感光區(qū)帶的IDV值。免疫組化結(jié)果用Motic ImagesAdvanced 3.2圖像分析系統(tǒng)采集照片，并進(jìn)行定量分析。 8．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS(statistical package for the social science)統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。各組實(shí)驗(yàn)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示，計(jì)量資料兩組間與同組間

5、前后比較用Student's t檢驗(yàn)，P<0.05視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 一、大鼠腦組織含水量測(cè)定模型組大鼠出血同側(cè)腦組織含水量于6h開(kāi)始明顯升高，48h達(dá)高峰(平均含水量為83.52％)；出血對(duì)側(cè)僅于48h明顯升高。給予七葉皂苷鈉治療后，各時(shí)間點(diǎn)兩側(cè)腦組織含水量均明顯下降。 二、病理組織學(xué)觀(guān)察光鏡下，腦出血后24h血腫周?chē)梢?jiàn)神經(jīng)元胞體明顯腫脹，少量膠質(zhì)細(xì)胞增生，細(xì)胞間隙和血管周?chē)g隙增寬；48-72h

6、上述病變加重，并見(jiàn)大量神經(jīng)元胞核濃縮，胞質(zhì)紅染加深，細(xì)胞間隙出現(xiàn)大量空泡，膠質(zhì)細(xì)胞增生活躍。給予治療后，血腫周?chē)∽兠黠@減輕：24h時(shí)血腫周?chē)鷺O少量膠質(zhì)細(xì)胞增生，細(xì)胞間隙和血管周?chē)g隙的增寬均不明顯；48-72h時(shí)，可見(jiàn)增生的膠質(zhì)細(xì)胞增多，神經(jīng)元胞體腫脹，細(xì)胞間隙和血管周?chē)g隙增寬很明顯，少量神經(jīng)元胞核濃縮，胞質(zhì)稍有紅染。 三、腦出血周?chē)M織超微結(jié)構(gòu)觀(guān)察結(jié)果假手術(shù)組大鼠針孔周?chē)X組織內(nèi)血管間的連接無(wú)明顯改變；模型組大鼠腦出血后4

7、8-72h，可見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接多處開(kāi)放；毛細(xì)血管基底膜斷裂；星形細(xì)胞明顯腫脹，部分變性、壞死；毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，呈不規(guī)則向管腔突出，管腔變窄。給予七葉皂苷鈉治療后，明顯改善。 四、GFAP陽(yáng)性細(xì)胞的改變假手術(shù)組大鼠針孔周?chē)X組織僅有少量的GFAP陽(yáng)性細(xì)胞；模型組大鼠腦出血后6h，血腫周?chē)推べ|(zhì)區(qū)GFAP陽(yáng)性細(xì)胞均有明顯增多，于48-72h達(dá)高峰，且可見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞明顯增生；給予七葉皂苷鈉治療后，各時(shí)間點(diǎn)的GFAP陽(yáng)性細(xì)胞均

8、有明顯下調(diào)。 五、血腦屏障緊密連接相關(guān)蛋白o(hù)ccludin表達(dá)的變化與假手術(shù)組比，模型組大鼠血腫周?chē)X組織在腦出血后6h，occludin表達(dá)無(wú)明顯改變；24h表達(dá)量明顯減少；48h表達(dá)量達(dá)最少。給予七葉皂苷鈉治療后，各時(shí)間點(diǎn)occludin的表達(dá)量均有不同程度的上調(diào)。討論腦出血是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病，腦水腫的發(fā)生是引起腦出血病情惡化的主要危險(xiǎn)因素。目前認(rèn)為治療腦出血的根本問(wèn)題在于促進(jìn)腦內(nèi)血腫的盡快吸收，控制腦水腫和減輕血

9、腫周?chē)^發(fā)性神經(jīng)元的損害，這是腦出血急性期減少病死率、降低致殘率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。 結(jié)論： 1．本研究證實(shí)：大鼠腦出血后腦水腫時(shí)，出現(xiàn)血腫周?chē)X組織occludin的表達(dá)抑制，提示occludin參與調(diào)節(jié)血腦屏障功能的穩(wěn)定性。 2．大鼠腦出血后血腫周?chē)鶪FAP陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)增強(qiáng)，48-72h達(dá)高峰，且可見(jiàn)明顯的細(xì)胞增生。 3．七葉皂苷鈉可以有效的緩解腦出血后occludin的表達(dá)抑制，并減弱GFAP陽(yáng)性細(xì)胞