兩種植物檢疫性丁香假單胞病原細(xì)菌的分子檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、Pseudomonas syringae pv.pisi和Pseudomonas syringae pv.maculicola分別為豌豆細(xì)菌性疫病和十字花科細(xì)菌性黑斑病的致病菌，在我國(guó)均被列入《中華人民共和國(guó)進(jìn)境植物檢疫性有害生物名錄》。本研究自主設(shè)計(jì)了針對(duì)這兩種病菌的特異性引物，建立了一套可靠、靈敏、快捷的分子檢測(cè)方法，有望從源頭上協(xié)助控制兩種檢疫性病菌的擴(kuò)散，為我國(guó)的植物檢疫提供技術(shù)支撐。
　　本研究以150株包括兩種靶標(biāo)菌在

2、內(nèi)的植物相關(guān)細(xì)菌為模板進(jìn)行了常規(guī)PCR擴(kuò)增，結(jié)果表明兩對(duì)特異性引物均沒(méi)有出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性。靈敏度測(cè)試結(jié)果表明常規(guī)PCR測(cè)定豌豆細(xì)菌性疫病菌純化DNA的檢測(cè)限為103fg/μl，菌懸液的檢測(cè)限為102CFU/ml。實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定純化DNA的檢測(cè)限可達(dá)102fg/μl，菌懸液的檢測(cè)限達(dá)10CFU/ml。豌豆模擬帶菌活體樣本的檢測(cè)中，特異性引物能夠分別從植物粗提物的102倍(常規(guī)PCR)、103倍(實(shí)時(shí)熒光定量PCR)稀釋液中檢測(cè)到

3、靶標(biāo)細(xì)菌。
　　以十字花科細(xì)菌性黑斑病菌的純化DNA及菌懸液梯度稀釋產(chǎn)物為模板進(jìn)行的靈敏度測(cè)試中，常規(guī)PCR以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢測(cè)限均為102fg/μl和10CFU/ml。在模擬種子帶菌的檢測(cè)中，常規(guī)PCR對(duì)經(jīng)種子浸泡液稀釋過(guò)的菌懸液的檢測(cè)限為105 CFU/ml，實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢測(cè)限為103CFU/ml。模擬帶菌種子抽樣檢測(cè)的結(jié)果表明，常規(guī)PCR可以檢測(cè)出帶菌率為5％的種子樣本（即10 g種子中含0.5 g帶菌種子）