佛手中活性成分提取分離及其體外活性測(cè)試研究.pdf

1、佛手是蕓香科植物香櫞的干燥果實(shí)，主要含有揮發(fā)油、香豆素類、黃酮類、多糖等化學(xué)成分，具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抗炎、抗氧化等藥理作用，作為重慶的一種道地藥材具有較高研究?jī)r(jià)值。當(dāng)前，對(duì)佛手植物的開發(fā)利用大多停留在其揮發(fā)油成分方面，而對(duì)佛手中大量的其他活性成分及其相應(yīng)的生物活性研究卻較少。據(jù)此，本文在綜述佛手藥材相關(guān)研究進(jìn)展的基礎(chǔ)上，對(duì)佛手的活性化學(xué)成分及生物活性進(jìn)行研究，為深入開發(fā)利用佛手資源提供科學(xué)依據(jù)。
　　本文的主要研究工作及成果包

2、括：
　　1.采用溶劑提取法對(duì)佛手進(jìn)行了系統(tǒng)分離和鑒定。以60％乙醇溶液為溶劑對(duì)佛手進(jìn)行提取后，采用有機(jī)溶劑萃取，重點(diǎn)對(duì)石油醚、乙酸乙酯萃取層進(jìn)行系統(tǒng)分離，然后利用柱層析、重結(jié)晶、制備薄層色譜等方法進(jìn)行分離純化，依照理化性質(zhì)和與標(biāo)準(zhǔn)核磁圖譜的對(duì)照，鑒定出了五種單體化合物，即：檸檬油素、濱蒿內(nèi)酯、傘形花內(nèi)酯、佛手柑內(nèi)酯和胡蘿卜苷，為后續(xù)的抗腫瘤活性成分的篩選及測(cè)試提供供試品。
　　2.采用單因素實(shí)驗(yàn)與正交優(yōu)化法對(duì)佛手多糖的水提

3、工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定提取佛手多糖的最佳參數(shù)為：提取溫度90℃、料液比1:15、提取時(shí)間2h、提取次數(shù)3次。通過苯酚-硫酸法對(duì)佛手粗多糖中的總多糖的含量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得佛手中總多糖在粗多糖中含量為61.51%。采用逐級(jí)醇沉法對(duì)佛手多糖類成分進(jìn)行初步分離，逐級(jí)醇沉得三種粗多糖（FSP-1、FSP-2和FSP-3），得率分別為5.75%、3.57%、4.34%，作為此后的抗氧化活性測(cè)試物。此外，采用DEAE纖維素柱層析法對(duì)佛手粗多糖FSP-1進(jìn)行

4、了分離純化，得到2種純多糖（BP-1、BP-2），BP-1和BP-2水解后，經(jīng)TLC分析，發(fā)現(xiàn)其單糖成分均為葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖。
　　3.采用體外細(xì)胞毒性測(cè)試實(shí)驗(yàn)，對(duì)分離得到的四種香豆素類成分（檸檬油素、濱蒿內(nèi)酯、傘形花內(nèi)酯、佛手柑內(nèi)酯）和佛手粗多糖的體外抗腫瘤作用效果進(jìn)行了測(cè)試。通過96孔板培養(yǎng)-熒光檢測(cè)分析，測(cè)試了上述四種香豆素類成分和佛手多糖的體外抗腫瘤作用，結(jié)合倒置顯微鏡觀測(cè)了上述分離產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響。研究顯示，

5、檸檬油素、濱蒿內(nèi)酯和佛手柑內(nèi)酯對(duì)143B人骨肉瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，顯微鏡觀測(cè)檸檬油素、濱蒿內(nèi)酯和佛手柑內(nèi)酯三種活性成分對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)情況的影響，也顯示出其對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖具有抑制作用。
　　4.基于化學(xué)發(fā)光分析法建立了適用于佛手多糖體外自由基清除能力測(cè)試的抗氧化活性評(píng)價(jià)方法。該方法根據(jù)系統(tǒng)化學(xué)發(fā)光被抑制的程度，評(píng)價(jià)佛手多糖對(duì)活性氧自由基的體外的清除能力。實(shí)驗(yàn)通過優(yōu)化化學(xué)發(fā)光體系實(shí)驗(yàn)參數(shù)，測(cè)試得到三種粗多糖（FSP-1、FS