蛹蟲草培養(yǎng)基中多糖和蟲草素的提取及純化研究.pdf

1、課題研究了蛹蟲草固體培養(yǎng)基中多糖的提取及純化工藝,對(duì)比了培養(yǎng)基中多糖與子實(shí)體蟲草多糖的結(jié)構(gòu)和抗氧化性能。同時(shí)研究了蛹蟲草固體培養(yǎng)基中蟲草素的提取及分離工藝,優(yōu)化了蟲草素的HPLC分析方法。
　　 1、研究了用水浴法、超聲波法和微波三種方法提取蛹蟲草培養(yǎng)基中多糖的實(shí)驗(yàn)條件。水浴法、超聲波法和微波法多糖提取率分別為81.21％、67.94％和89.64％。其中微波法多糖提取率較高,其工藝參數(shù)為:稱取干粉樣品,加15倍質(zhì)量的水,于微波

2、爐60W下提取1min,加20mL乙醇,0℃下放置24h,過(guò)濾得粗多糖。
　　 2、比較了蛹蟲草子實(shí)體中蟲草多糖與蛹蟲草培養(yǎng)基多糖的結(jié)構(gòu)和抗氧化性能。從紅外譜圖中發(fā)現(xiàn)兩者結(jié)構(gòu)相同,都具有糖類物質(zhì)的特征吸收峰。培養(yǎng)基多糖對(duì)O2-·和[·OH]的清除率隨多糖濃度的增大而增加,并且多糖除蛋白純化后,抗氧化性能略有增加,與子實(shí)體多糖抗氧化性能相似。當(dāng)培養(yǎng)基多糖濃度為1.0mg／mL時(shí),純化前對(duì)O2-·清除率為45.19％,對(duì)[·OH]清

3、除率為22.62％,純化后對(duì)O2-·清除率為49.06％,對(duì)[·OH]清除率為24.69％。
　　 3、研究了HPLC同時(shí)測(cè)定蟲草素和腺苷的方法,采用Inertsil ODS-SP(150×4.6mm,5μm)色譜柱,以乙腈-水為流動(dòng)相進(jìn)行色譜分離,流速1.0mL／min,柱溫35℃,DAD二極管陣列檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng)260nm,進(jìn)樣量10μL。在2-10μg／mL濃度范圍內(nèi),蟲草素和腺苷線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)分別為0.9998和

4、0.9992。蟲草素和腺苷的回收率分別是63.30％-67.11％和63.97％-70.39％,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別是0.56％-1.97％和0.94％-1.97％,檢出限分別是0.19μg／mL和0.02μg／mL。
　　 4、用正交實(shí)驗(yàn)研究了培養(yǎng)基中蟲草素的提取工藝。水浴法、超聲波法、微波法和超臨界法的提取率分別為58.20％、69.05％、85.65％和9.63％。其中微波法蟲草素提取率較高,其工藝參數(shù)為:稱取干粉樣品,加10

5、倍質(zhì)量的水,于微波爐中40W下提取3min。
　　 5、研究了純蟲草素在732陽(yáng)離子交換樹脂、717陰離子交換樹脂和硅膠上的吸附解析性能。在732陽(yáng)離子交換柱上,用O.15mol／I.,氨水作洗脫劑,蟲草素的洗脫率為91.14％；在717陰離子交換樹脂上,用水作洗脫劑,蟲草素的洗脫率為82.83％～在硅膠柱上,用氯仿:甲醇:石油醚(9:1:4)作洗脫劑,蟲草素的洗脫率為89.35％。用732陽(yáng)離子交換樹脂純化蛹蟲草培養(yǎng)基蟲草素提