HIV-1Vpr激光細胞NF-κB信號通路分子機制的研究.pdf

1、Vpr是由人類免疫缺陷病毒(Ⅰ)型(HIV-1)編碼的輔助蛋白。Vpr蛋白在病毒感染晚期表達，通過與Gag p6直接相互作用被包裝到病毒顆粒中。Vpr在HIV-1復制及致病性等方面發(fā)揮重要作用，特別是能夠在病毒感染早期改變細胞環(huán)境，使之有利于病毒復制。vpr基因的缺失會導致病毒復制能力顯著下降。Vpr具有多種功能，包括可調節(jié)細胞NF-κB在內的多條信號通路，但Vpr對NF-κB信號通路的確切作用及其中的分子機制尚不明確。本文對Vpr與N

2、F-κB信號通路的關系展開研究，獲得相關實驗數據如下:
　　1.證實Vpr可同時激活NF-κB經典和非經典信號通路:發(fā)現在HIV-1感染早期，病毒顆粒包裝的Vpr能增強IκBα的磷酸化;同時，Vpr可以促進p65磷酸化及入核并最終激活NF-κB報告基因;過表達Vpr及病毒顆粒攜帶的Vpr均能引起p100的磷酸化，促進p100剪切為p52，從而活化非經典通路。
　　2.Vpr與NF-κB經典和非經典信號通路上游的IKKα和IK

3、Kβ存在相互作用，并調節(jié)二者的磷酸化;利用RNA干擾技術下調細胞內源p65、RelB、IKKα及IKKβ的表達，發(fā)現Vpr對NF-κB信號通路的激活作用明顯減弱。
　　3.通過免疫共沉淀實驗對IKK復合物上游關鍵調節(jié)因子的篩選，發(fā)現Vpr與TRAF6及TAK1在體內存在相互作用，不與TRAF2及TAB1相互作用。但Vpr并不能影響TRAF6的自身泛素化。過表達和病毒感染兩個層面均證實Vpr可在多種細胞中增強TAK1第187位蘇氨酸

4、(Thr187)的磷酸化，導致底物蛋白IKKα、IKKβ及MKK7的磷酸化，進而活化下游信號通路;同時，Vpr對TAK1的磷酸化依賴于TAB1及TRAF6;此外，Vpr通過募集TAB3促進TAK1的泛素化。
　　4.對Vpr活化NF-κB信號通路后對自身功能的影響進行初探:在NF-κB信號通路關鍵蛋白下調的細胞系中，檢測Vpr對HIV-1 LTR的激活作用，結果表明，Vpr介導的NF-KB活化促進了其對LTR的激活作用;進一步通過

5、流式細胞術分析了Vpr在這些細胞系中誘導細胞周期G2/M期停滯的能力，初步證明NF-κB信號通路的激活有助于Vpr行使細胞周期停滯功能。
　　綜上所述，本文證實了HIV-1感染宿主細胞早期，Vpr能夠激活細胞內NF-κB經典和非經典信號通路，并初步闡明其中的分子機制:Vpr一方面通過增強IKKα及IKKβ的磷酸化，另一方面通過結合并增強TAK1的活性，共同實現了“劫持”NF-κB信號通路的目的，并促進自身LTR的轉錄、引起細胞周期