吸入性糖皮質(zhì)激素對哮喘大鼠中TLR-7表達的影響.pdf

1、目的：
　　通過吸入糖皮質(zhì)激素（布地奈德）干預哮喘大鼠，觀察氣道炎癥，測定氣道阻力、肺組織中TOLL樣受體7（TLR7）的mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達，觀察相關細胞因子IFN-γ、IL-12mRNA轉(zhuǎn)錄的變化情況，了解吸入性糖皮質(zhì)激素對肺組織中TLR7受體的影響及相關細胞因子的變化。
　　方法：
　　1.40只清潔健康，約1月齡，體重150-170克的雄性SD大鼠，隨機分配為以下四個組別：正常對照組（Control組）、哮喘

2、模型組（Model組）、地塞米松干預治療組（Dexamethasone，DXM組），布地奈德混懸液干預治療組（Budesonide，BUD組），每組各10只。
　　2. Model組、DXM組、BUD組大鼠分別于實驗第1天、第8天腹腔注射10﹪卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)溶液1毫升，包含免疫佐劑氫氧化鋁100毫克，實驗第15天，用2﹪卵清蛋白溶液4毫升對大鼠進行霧化吸入激發(fā)，每天霧化1次，每次約為10分鐘，連續(xù)14天。D

3、XM組大鼠在霧化吸入激發(fā)前半小時，給予腹腔注射地塞米松注射液，劑量為0.5毫克/千克, BUD組給予2毫升（1mg）布地奈德混懸液霧化吸入。在致敏階段與霧化激發(fā)階段，Control組采用0.9％氯化鈉代替卵清蛋白溶液進行腹腔注射與霧化吸入。3.實驗第28天，四組大鼠分別予以水合氯醛腹腔注射麻醉后用肺功能檢測氣道阻力變化，檢測完成后用腹主動脈放血方法處死大鼠，分別取各組左右兩側(cè)肺組織，其中左肺組織作實時熒光定量聚合酶連鎖反應法（quant

4、itative real-time PCR，qPCR）來檢測肺組織TLR7、IL-12和IFN-γ mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，并通過Western Blot檢測方法檢測大鼠肺組織中TLR7的蛋白表達水平；右側(cè)肺組織通過病理HE染色方法對各組大鼠肺組織進行形態(tài)學觀察，分析四組大鼠中氣道炎癥的變化情況。
　　結(jié)果：
　　1．亞急性哮喘大鼠模型的建立：除Contol組外，其他三組大鼠隨著激發(fā)次數(shù)的增加，開始出現(xiàn)煩躁不安、抓耳撓腮、食欲減

5、退、脫毛、呼吸急促、反應遲鈍等哮喘樣表現(xiàn)；實驗第28天進行氣道反應性測定，顯示Model組大鼠氣道反應性有增高，與Control組比較具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；結(jié)合HE染色肺組織切片的形態(tài)學檢查顯示，Model組氣道周圍大量炎癥細胞增多，嗜酸性粒細胞增加，氣道平滑肌增生，管腔內(nèi)粘性分泌物明顯增多，提示大鼠哮喘模型構(gòu)建成功。
　　2．BUD組病理組織學與氣道阻力檢測變化：經(jīng)干預后的哮喘大鼠肺組織病理學顯示，與Model組比較，

6、BUD組氣道炎性反應減輕，與DXM相類似。大鼠氣道阻力測定， BUD組氣道阻力在不同濃度鹽酸組胺誘導下，其阻力值與Model組比較減低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；與Control組比較增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；與DXM比較，差異無統(tǒng)計學意義。
　　3．BUD組肺組織TLR7mRNA與TLR7蛋白表達量變化：哮喘大鼠Model組TLR7mRNA與蛋白的表達量均較Control組明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(

7、P＜0.05)；BUD組與DXM組TLR7mRNA及蛋白表達量同Model組比較均明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。BUD組與DXM組TLR7mRNA及蛋白表達量相比，差異無統(tǒng)計學意義。與Control組比較，明顯低于Control組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　4. BUD組肺組織IFN-γ和IL-12的mRNA表達量變化：Model組IL-12 mRNA與IFN-γmRNA表達量較Control組比較

8、均明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)； BUD組、DXM組表達量較Model組比較，IL-12和IFN-γ的mRNA的表達量均顯著增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；但仍低于Control組(P＜0.05)；BUD組與DXM組相比差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1.卵清蛋白致敏與激發(fā)成功構(gòu)建亞急性哮喘大鼠模型。吸入性糖皮質(zhì)激素（布地奈德）能減輕氣道炎癥與降低氣道高反應性。
　　2.布地奈德干預治療哮