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文檔簡介
1、目的:
通過將PHY106-HBV質粒(含C基因型HBV的全基因組)轉染至體外培養(yǎng)的正常人近端腎小管上皮細胞(HK-2),研究乙型肝炎病毒(HBV)在HK-2細胞內的表達和對HK-2細胞轉分化的作用及其機制。初步探討乙型肝炎病毒在乙型肝炎病毒相關性腎炎(HBV-GN)中的作用機制。
方法:
將體外培養(yǎng)HK-2細胞,分為HK-2組、HK-2-PHY106組(轉染空質粒PHY106組)、HK-2-P
2、HY106-HBV組(轉染PHY106-HBV質粒組)和SB203580(轉染PHY106-HBV質粒前加入P38絲裂原活化蛋白激酶特異性抑制劑預處理)組。用脂質體lipofectamineTM2000轉染HK-2細胞。用電化學發(fā)光免疫分析法(ECLIA法)檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中HBsAg與HBeAg的含量。免疫細胞化學染色檢測轉染72h后各組E-鈣粘素(E-cadherin)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達。半定量RT-PC
3、R法檢測轉染72h后轉化生長因子-1(TGF-β1)mRNA在各組細胞的表達情況。Westernblot印跡檢測轉染72h后各組E-cadherin、α-SMA、磷酸化P38絲裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)和P38MAPK(P38絲裂原活化蛋白激酶)的蛋白表達情況及加入P38MAPK特異性抑制劑SB203580后對E-cadherin和α-SMA蛋白表達的影響。
結果:
HK-2-PHY106-HBV
4、組細胞培養(yǎng)上清液中可檢測到HBsAg和HBeAg的高表達;免疫細胞化學染色及Western印跡均顯示HK-2-PHY106-HBV組E-cadherin蛋白表達顯著下調(P<0.05),而α-SMA蛋白表達明顯上調(P<0.05)。RT-PCR法顯示HK-2-PHY106-HBV組的TGF-β1mRNA表達上調(P<0.05)。Western印跡顯示HK-2-PHY106-HBV組的p-P38MAPK蛋白表達明顯上調(P<0.05),加
5、入SB203580后p-P38MAPK蛋白表達明顯下調(P<0.05),且能阻止HBV引起的E-cadherin蛋白下調和α-SMA蛋白上調(P<0.05)。
結論:
HBV可在HK-2細胞內高效復制,表達乙肝表面抗原和乙肝e抗原,并且能夠導致HK-2細胞轉分化,其機制可能是通過激活TGF-β1/P38MAPK信號通路來實現(xiàn)的,P38MAPK的特異性抑制劑SB203580可有效阻止HBV引起的腎小管上皮細胞轉
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