力達霉素聯合利妥昔單抗治療人B細胞淋巴瘤的作用及機制研究.pdf

1、目的:力達霉素是一種烯二炔類抗腫瘤抗生素，它對多種腫瘤細胞有強烈的殺傷作用。利妥昔是一種用于治療惡性腫瘤的單克隆抗體藥物，適應癥為B細胞非霍奇金淋巴瘤。研究表明，利妥昔單抗與化療藥物、力達霉素聯合多種化療藥物對腫瘤細胞均有較好的協同效果。本研究主要探討力達霉素與利妥昔單抗聯合抗人B細胞淋巴瘤的作用和機制。
　　方法:以人B細胞淋巴瘤細胞株Raji和Ramos為模型，通過MTS法研究力達霉素、利妥昔單抗以及聯合方案對腫瘤細胞的增殖抑

2、制作用。PI染色后用流式細胞術檢測細胞周期分布的變化。采用Annexin V-FITC/PI法檢測細胞的凋亡比率。Western Blot檢測凋亡相關蛋白以及相關信號通路蛋白的表達量變化。最后用人B細胞淋巴瘤裸鼠模型驗證該聯合方案對淋巴瘤的體內抑制作用。
　　結果:利妥昔單抗在體外單獨處理Raji和Ramos細胞48h，結果其抑制率較低，且沒有劑量依賴性。利妥昔單抗與力達霉素同時聯合處理Raji和Ramos細胞48h，聯合效果不明

3、顯。利妥昔單抗預處理細胞48h后，再與力達霉素聯合處理的方案各組聯合效果較好，有兩種濃度的聯合方案增效指數小于0.7。流式細胞術分析細胞周期分布，結果顯示作用24h后，預處理聯合方案各組與力達霉素單藥組相比，單藥組有更顯著的G2/M阻滯;而聯合方案各組G2/M阻滯降低并有一定的G1阻滯。流式細胞術分析細胞凋亡比率發(fā)現，預處理聯合方案組的細胞凋亡比率顯著多于力達霉素單藥組。Western Blot結果顯示，相比力達霉素單藥組，預處理聯合組

4、明顯誘導Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9和PARP的剪切形式的升高，而凋亡抑制作用的cIAP-2和Bcl-2表達降低。pEGFP-N1質粒轉染Ramos細胞篩選得到穩(wěn)定細胞株后，尾靜脈接種BALB/c小鼠并加藥處理，結果顯示，聯合處理組小鼠生存時間明顯高于對照組和單藥組;小動物活體成像分析顯示，相比對照組、利妥昔單抗單藥組和力達霉素單藥組，預處理聯合組小鼠腫瘤的脾和淋巴結轉移富集程度明顯降低。
　　結論: