紅豆草原生質體分離與培養(yǎng)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、原生質體能夠克服性細胞的不親和障礙，進行遠緣的體細胞雜交，還可直接攝取外源的DNA、細胞器、病毒、質粒等，是進行遺傳轉化研究的理想受體。本試驗以普通紅豆草無菌苗子葉和下胚軸誘導的愈傷組織為材料，深入研究了紅豆草原生質體分離和培養(yǎng)條件。研究結果如下： 1.建立了紅豆草下胚軸胚性愈傷組織誘導體系。誘導培養(yǎng)基：MS+2mg/L2,4-D+0.6mg/L 6-BA，其出愈率為94.5％；增殖培養(yǎng)基為：MS+2mg/L 2,4-D+0.6

2、mg/L6-BA+400mg/L LH，繼代10d愈傷組織增長量為1.72mm。 2.建立了紅豆草原生質體快速分離體系。以愈傷組織作為游離材料其最佳酶解液成分為2％Cellulase Onozuka R-10(纖維素酶)+0.5％Pectinase(果膠酶)+0.5％Macerozyme R-10(離析酶)+5m mol/L MES+0.5mol/L甘露醇，溶于CPW溶液中，pH為5.8，在25℃黑暗條件下，于50r/min水浴

3、振蕩儀上酶解10h。以子葉作為酶解材料，最佳酶解液成分為1％Cellulase OnozukaR-10+0.8％Pectinase+0.5％Macerozyme R-10+5mmol/L MES+0.55mol/L甘露醇，pH為6.0，在25℃黑暗條件下，于50r/min水浴振蕩儀上酶解6h。 3.在三種酶解材料預處理方法中，質壁分離法和低壓滲透法可有效提高子葉和下胚軸來源愈傷組織原生質體的產(chǎn)量和活力，而黑暗低溫處理對兩種材料的

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