二硫化碳對雄性大鼠睪丸組織氧化損傷和細胞凋亡的影響及環(huán)孢素A的干預(yù)作用.pdf

1、目的：二硫化碳（carbon disulfide，CS2）是工業(yè)上常用的有機溶劑和化工原料，廣泛應(yīng)用于粘膠纖維生產(chǎn)、玻璃紙制造業(yè)和有機溶劑等生產(chǎn)過程中。近年來CS2對男（雄）性生殖系統(tǒng)的影響也被廣泛研究，主要表現(xiàn)為性功能障礙、生殖器萎縮、內(nèi)分泌激素紊亂及精子生成和活力的降低等。但目前關(guān)于CS2對男（雄）性生殖損傷作用的研究鮮有報道。本實驗選取雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠進行亞慢性吸入染毒，初步探討 CS2對大鼠一般狀況，

2、睪丸組織病理學(xué)變化，睪丸功能標志酶，睪丸組織氧化損傷和睪丸生殖細胞凋亡線粒體通路的影響及其可能的分子機制，同時觀察環(huán)孢素 A（cyclosporin A，CsA）的干預(yù)作用。為闡明CS2對男（雄）性生殖損傷的作用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：清潔級健康雄性SD大鼠36只并隨機分為6組：即空白對照組、3個CS2濃度組（50,250,1250 mg/m3）、CsA干預(yù)組〔CS2(1250 mg/m3)+CsA(12.5 mg/kg)〕和C

3、sA對照組（12.5mg/kg）。CS2靜式吸入染毒，每天2小時，每周5天，共10周，空白對照組僅吸入新鮮空氣。CsA則依據(jù)大鼠體重并按12.5mg/kg的比例溶解于牛奶中，在CS2染毒4周后進行灌胃干預(yù)，每天1次，每周5天，共6周。觀察大鼠一般狀況，每周末記錄大鼠體重，染毒結(jié)束后稱量各組大鼠體重，斷頭處死大鼠，稱量睪丸重量；睪丸組織蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin,HE）染色觀察其形態(tài)學(xué)改變；提取睪丸組織總蛋白，應(yīng)用分

4、光光度法檢測大鼠睪丸組織中丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量，超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）和過氧化氫酶（catalase,CAT）活性以及乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase,LDH）和γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)肽酶（gamma-glutamyl transpeptidase,γ-GT）活性，應(yīng)

5、用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）檢測大鼠睪丸組織中8-羥基脫氧鳥苷（8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG）含量，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose6-phosphatedehydrogenase,G-6-PD）和山梨醇脫氫酶（sorbitol dehydrogenase,SDH）活性；原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)（TdT-mediated

6、dUTP Nick-End Labeling,TUNEL）檢測大鼠睪丸生殖細胞凋亡情況；蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）檢測大鼠睪丸組織中Cyt C、Bcl-xL、Bad、Caspase-9、Caspase-3和PARP蛋白的相對表達水平。
　　結(jié)果：實驗結(jié)果表明，10周CS2染毒期間，各組大鼠生長狀況良好，染毒后期部分大鼠出現(xiàn)毛發(fā)枯槁、活動減少、精神萎靡和體型消瘦等癥狀。CS2染毒對大鼠生長發(fā)育無明顯影響，隨著CS2染毒

7、濃度的增加，HE染色大鼠睪丸組織形態(tài)損傷情況不斷加劇，CsA干預(yù)對大鼠睪丸組織形態(tài)有一定緩解。G-6-PD、γ-GT和SDH活性均在低濃度組時顯著性上升，明顯高于空白對照組（P<0.01，P<0.05）；隨后中、高濃度組G-6-PD、γ-GT和SDH活性開始下降，與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；CS2染毒組LDH活性與空白對照組比較無明顯差異（P>0.05）；CsA干預(yù)對睪丸功能標志酶活性無明顯影響。抗氧化酶SOD、GSH-PX和CA

8、T活性呈下降趨勢（P<0.01，P<0.05），而脂質(zhì)過氧化分解產(chǎn)物MDA和DNA損傷標志物8-OHdG則有明顯上升（P<0.01），CsA干預(yù)對大鼠睪丸組織氧化損傷具有一定的保護作用。中、高濃度組的凋亡指數(shù)明顯高于空白對照組（P<0.05）；CsA干預(yù)后，CsA干預(yù)組的凋亡指數(shù)有明顯下降（P<0.05），但仍高于空白對照組（P<0.05）。Western Blot結(jié)果顯示，CS2染毒組CytC、Bad蛋白含量與空白對照組比較有明顯增加

9、（P<0.05），而Procaspase-9、Procaspase-3、PARP和Bcl-xL蛋白含量則有下降的趨勢（P<0.05）。CsA干預(yù)后，與高濃度組比較，CsA干預(yù)組Cyt C蛋白含量明顯下降（P<0.05），PARP、Bcl-xL蛋白含量則顯著提高（P<0.05）；Procaspase-9、Procaspase-3和Bad蛋白含量均有不同程度的變化，但與高濃度相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：一定濃度的CS2對大鼠睪丸