血管內皮生長因子裸質粒經心內膜心肌內注射治療豬心肌缺血模型的實驗研究.pdf

1、研究目的:1.構建VEGF基因與EGFP基因的真核共表達載體pIRES2-EGFP-hVEGF165,對離體與在體心肌細胞和內皮細胞進行轉染,以確定VEGF基因與EGFP基因的表達狀況;2.在體內、外實驗中,對NOGA電機械標測系統(tǒng)位置、距離及容量測量的精度進行測定,并分析該方法與其他檢測方法的相關性;3.利用NOGA電機械標測系統(tǒng)區(qū)分正常心肌與梗死心肌;4.評價NOGA心內膜注射導管pIRES2-EGFP-hVEGF165質粒轉染的治

2、療效果及其安全性.研究方法:1.以基因克隆法構建pIRES2-EGFP-hVEGF165真核共表達載體,采用小量酶切法對重組質粒進行鑒定;以脂質體法介導目的基因轉染離體心肌細胞和內皮細胞,以經心外膜心肌內注射法轉染在體心肌組織;采用RT-PCR、Western-blotting、熒光顯微鏡及免疫組化染色等方法分別檢測hVEGF165基因與EGFP基因在心肌細胞與內皮細胞中的表達.2.應用NOGA電機械標測系統(tǒng)對體外已知的點、線、容積進行

3、重復測量,利用統(tǒng)計學方法分析其可重復性和準確性;以NOGA電機械標測系統(tǒng)和左心室造影系統(tǒng)同時測定某些心功能指標,以統(tǒng)計學方法分析其相關性;通過動脈內球囊導管以冠狀動脈內栓塞法建立豬心肌梗死模型,以統(tǒng)計學方法分析梗死前、后的NOGA標測值.3.通過NOGA電機械標測系統(tǒng)以心內膜注射導管進行心肌內質粒轉染,觀察質粒轉染前后血液學指標、超聲心動圖以及NOGA標測結果的變化情況;術后3個月行冠狀動脈造影以了解側支循環(huán)形成情況;處死動物后行組織病