蛋白聚糖Ⅱ重組腺病毒載體對糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用.pdf

1、研究背景和目的:糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病最為常見和嚴重的微血管并發(fā)癥,已成為四大主要致盲因素之一.隨著人民生活水平的提高,糖尿病發(fā)病率急劇上升,盡管在用激光光凝和玻切手術治療DR方面取得了進展,但是糖尿病患者失明的危險性仍然比正常人高25倍.因此,研究DR的發(fā)病機制對防治該病具有重要意義.近來研究表明DR的發(fā)生發(fā)展與細胞增殖調控失常有關,而生長因子與視網(wǎng)膜多種細胞的生長增殖有密切關系,在諸多影響視網(wǎng)膜微血管病變的細胞因子中,轉化

2、生長因子β(TGF-β)已經(jīng)得到肯定.TGF-β是一種多功能的細胞間信號蛋白,具有多種生物學效應,在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮的作用也十分復雜,主要通過對細胞增殖分化和細胞外基質的影響,促進新生血管腔形成,參與細胞凋亡等發(fā)揮作用,并與其他生長因子協(xié)調共同作用等. 蛋白聚糖Ⅱ,又稱decorin(DCN),是內源存在的蛋白聚糖,通過參與調控細胞的增殖、分化,調節(jié)基質形成、膠原纖維的結構和生成速度,發(fā)揮抗纖維化,抑制新生血管

3、形成等的作用.Decorin不僅可以結合TGF-β2,抑制其生物活性,而且能夠抑制TGF-β2mRNA的轉錄和翻譯,減少TGF-β2的表達.Border等的實驗證明注射一定劑量的Decorin均能使TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3活性降低,從而阻斷TGF-β與其受體的相互作用,達到抑制纖維化的目的.外源性補充decorin在糖尿病視網(wǎng)膜病變中日益受到重視. 基因治療具有巨大的開發(fā)潛力及應用前景,將外源性的基因導入生物細胞

4、有許多技術方法或載體.為進一步研究TGF-β2在DR發(fā)生發(fā)展過程的表達變化以及外源性增加decorin是否對TGF-β 2的作用,本實驗利用大鼠DCN重組腺病毒載體(本實驗成員前期已構建并鑒定)感染糖尿病大鼠,觀察不同時間點TGF-β 2Mrna表達變化及外源性增加decorin是否對TGF-β2發(fā)揮作用,為臨床預防、治療糖尿病視網(wǎng)膜病變提供一種可能方法. 因此設計并進行如下實驗: 1.鏈脲佐菌素制備大鼠糖尿病模型,于造

5、模成功后8W注射DCN重組腺病毒載體感染糖尿病動物模型,并注射相同劑量的ad-LacZ的作為對照組,分別于8W,12W,16W,20W測血糖和體重,并取視網(wǎng)膜標本進行實驗. 2.利用RT-PCR方法檢測各組不同時間點TGF-β2mRNA的表達.實驗結果: 1)各組血糖及體重的變化:各時間點糖尿病組及ad-DCN,ad-LacZ組大鼠體重與正常對照組相比,差異有顯著意義.正常對照組大鼠血糖較平穩(wěn)各時間點比較差異無顯著意義,

6、糖尿病組,ad-DCN及ad-LacZ組大鼠血糖維持在高水平,與正常對照組比較,差異有顯著意義.糖尿病組與ad-DCN組、ad-LacZ組的血糖與體重水平無明顯差異. 2)各組不同時期的TGF-β2mRNA的表達:與正常對照組相比,糖尿病組,ad-DCN及ad-LacZ組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β2mRNA的表達于8W時下降,12周時糖尿病組,ad-DCN組與ad-LacZ組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β2mRNA的表達高于正常對照組,且差

7、異有統(tǒng)計學意義,但12周時AD-DCN組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β2mRNA的表達低于糖尿病組與ad-LacZ組.在16周和20周時糖尿病組,ad-DCN組與ad-LacZ組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β2mRNA的表達繼續(xù)升高,高于正常組,ad-DCN組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β2mRNA的表達低于糖尿病組與ad-LacZ組. 結論: 1.糖尿病大鼠視網(wǎng)膜TGF-β2早期有所下降,可能是周細胞數(shù)目減少導致TGF-β2分泌下降造成,于1