過氧化物酶體增殖物活化受體γ在哮喘氣道炎癥和重建中的作用.pdf

1、支氣管哮喘(下稱哮喘)是一種常見的呼吸系統(tǒng)疾病病，全球發(fā)病率逐年增高。慢性氣道炎癥和氣道重建是哮喘主要特征，研究表明二者相互影響互為因果，共同導(dǎo)致氣道的高反應(yīng)性和呼吸道癥狀。深入探討氣道炎癥和重建的機(jī)制對(duì)于發(fā)現(xiàn)新的、有效的哮喘治療方法具有重要意義。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，過氧化物酶體增殖物活化受體丫(peroxisomeProliferator-activatedreceptorγ，PPAR7)參與多種疾病的炎癥和重建過程，具有廣泛的抗炎、抗

2、重建作用；但對(duì)PPAR7在哮喘氣道炎癥和重建中的作用尚缺乏統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)。本課題從體內(nèi)、體外兩方面，研究PPAR7參與哮喘氣道炎癥和重建的機(jī)制。 第一部分PPAR7在慢性哮喘小鼠氣道炎癥和重建中的作用 第一節(jié)：慢性哮喘小鼠模型的建立及PPAR7的表達(dá) 目的：觀察慢性小鼠氣道炎癥和重建的表現(xiàn)，明確PPAR7的表達(dá)和組織學(xué)定位。方法：以卵白蛋白(ovalbumin，OVA)致敏并激發(fā)的方法建立小鼠慢性哮喘模型。檢測(cè)BAL

3、F中細(xì)胞數(shù)和IL．．4水平，病理切片觀察小鼠肺內(nèi)炎癥細(xì)胞情況、氣道管壁及平滑肌厚度、粘膜血管新生和血管管壁厚度，以及氣道旁和血管旁膠原纖維沉積情況。測(cè)定肺組織羥脯氨酸含量和對(duì)腺苷、乙酰膽堿的反應(yīng)性。免疫組化方法檢查PPAR7表達(dá)的組織學(xué)定位。結(jié)果：哮喘組小鼠煩躁不安、呼吸急促、腹肌痙攣；BALF中自細(xì)胞總數(shù)、嗜酸細(xì)胞及淋巴細(xì)胞均較對(duì)照組顯著升高；氣道上皮損傷、杯狀細(xì)胞增生明顯，粘液分泌增加；支氣管周圍大量炎癥細(xì)胞聚集；氣道旁和血管旁膠原

4、纖維增生；氣道平滑肌層和血管壁增厚。氣道對(duì)腺苷、乙酰膽堿的反應(yīng)性增高。在哮喘小鼠的氣道上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和炎癥細(xì)胞中有明顯的PPARy表達(dá)。結(jié)論：OVA致敏并霧化激發(fā)能建立具有廣泛炎癥和重建表現(xiàn)的慢性哮喘小鼠模型。在哮喘肺組織內(nèi)有明顯的PPAR?表達(dá)，組織學(xué)上主要集中在氣道上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和炎癥細(xì)胞。 第二節(jié)PPAR7調(diào)節(jié)劑對(duì)慢性哮喘小鼠氣道炎癥和重建的影響。 目的：探討PPAR7調(diào)節(jié)劑對(duì)慢性哮喘小鼠氣道炎癥和重建

5、中的作用及其機(jī)制。方法：以PPAR7激動(dòng)劑和拮抗劑分別霧化處理哮喘小鼠，觀察小鼠的病理學(xué)變化、炎癥因子和PPAR7的表達(dá)。結(jié)果：PPAR~激動(dòng)劑治療后小鼠BALF中炎癥細(xì)胞和l-4水平，氣道和肺組織的炎癥和重建程度減輕(P<0．01)。westernblot檢查發(fā)現(xiàn)肺組織核蛋白中PPAR7的表達(dá)增加2．7倍，而TGF61和eotaxin的轉(zhuǎn)錄下降65％和50％，與核內(nèi)PPAR?成負(fù)相關(guān)(r=-0．895、0．954)、。結(jié)論：PPAR7

6、激動(dòng)劑能通過提高核內(nèi)PPAR7水平，改善慢性哮喘小鼠的氣道炎癥和重建。 第二部分PPAR7在氣道上皮細(xì)胞中的作用及其機(jī)制 第一節(jié)人支氣管上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)和PPAR7的表達(dá)。 目的：建立人支氣管上皮細(xì)胞(humanbronchialepithelialcells，hBECs)原代培養(yǎng)的方法，并觀察PPARy的表達(dá)。方法：解剖手術(shù)切除的人支氣管標(biāo)本，以植塊法體外培養(yǎng)hBECs。以TGFBl和IL-4聯(lián)合刺激hBEC

7、s，并以RT-PCR方法測(cè)定eotaxin和Fibronectinl(FNl)，免疫熒光法確定hBEC中PPAR7的表達(dá)。結(jié)果：應(yīng)用植塊法成功培養(yǎng)原代hBECs，每lcm葉支氣管可獲得hBECs6-7×106。RT-PCR結(jié)果顯示hBECs經(jīng)TGFBl和IL-4刺激激6h后，eotaxin和FNl的轉(zhuǎn)錄分別較刺激前增強(qiáng)10倍和5．7倍(P<0．01)。免疫熒光結(jié)果顯示，經(jīng)TGFBl和IL-4刺激的hBECs胞漿內(nèi)有PPAR7的表達(dá)。結(jié)論

8、：經(jīng)TGFBl和IL-4處理的hBECs能模擬在哮喘的體內(nèi)狀態(tài)，eotaxin和FNl轉(zhuǎn)錄增加，胞漿內(nèi)有PPARy的表達(dá)。第二節(jié)PPAR7激動(dòng)劑對(duì)氣道上皮細(xì)胞功能的調(diào)控及其機(jī)制。目的：探討PPAR7激動(dòng)劑調(diào)控氣道上皮細(xì)胞功能的機(jī)制。方法：在不同時(shí)間點(diǎn)、以不同劑量的羅格列酮干預(yù)hBECs，westemblot檢測(cè)PPARy和GRa的表達(dá)：以RT-PCR方法測(cè)定羅格列酮和布地奈德對(duì)eotaxin和FNl轉(zhuǎn)錄的影響。結(jié)果：羅格列酮以劑量相關(guān)方

9、式促進(jìn)PPARy和GRa向核內(nèi)的轉(zhuǎn)移(P<0．01)，但與干預(yù)時(shí)間無關(guān)。羅格列酮和布地奈德均以劑量相關(guān)方式抑制細(xì)胞eotaxin和FNl的轉(zhuǎn)錄，且二者聯(lián)合使用的作用高于單一用藥(P<0．01)。結(jié)論：PPARy激動(dòng)劑通過促進(jìn)PPAR7和GRa的核轉(zhuǎn)位，抑制炎癥和纖維化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。 課題主要結(jié)論： 1．PPAR7參與慢性哮喘中的抗炎癥和抗重建過程。 2．PPARy激動(dòng)劑以劑量依賴的方式持續(xù)增強(qiáng)PPAR7的核轉(zhuǎn)位