腸道外致病性大腸埃希菌產超廣譜β-內酰胺酶的耐藥性及基因分型.pdf

1、目的：了解福建地區(qū)腸道外致病性大腸埃希菌對常用抗菌藥物的耐藥現(xiàn)狀；調查本地區(qū)該菌的產超廣譜B內酰胺酶情況，建立簡便實用的快速檢測方法；明確本地區(qū)ESBLs相關編碼基因的基因型別及特征，為建立產超廣譜β-內酰胺酶ExPEC的分子流行病學篩查和臨床診斷方法奠定基礎。 方法：對2003年～2005年間從福建地區(qū)7家醫(yī)院收集的腸道外致病性大腸埃希菌用瓊脂稀釋法進行藥敏試驗。分別用終濃度為1μg／ml頭孢他定和頭孢噻肟對這些菌株進行ESB

2、Ls初篩，任一底物檢測出現(xiàn)結果陽性，就采用臨床實驗室標準化研究所(CLSI)推薦的表型確證試驗確證之。同時設計肉湯微量稀釋法，先對國際標準菌株大腸埃希菌ATCC25922(非產ESBLs菌株)和肺炎克雷伯菌ATCC700603(產ESBLs菌株)重復試驗40次，驗證其可靠性，再用該法檢測59株產ESBLs菌株和33株非ESBLs菌株，以CLSI推薦的表型確證試驗結果為標準，確定本研究建立的方法的真實性。用脈沖場凝膠電泳(PFGE)檢測產

3、ESBLs菌株的質粒譜帶。設計通用引物，用聚合酶鏈式反應(PCR)技術檢測產酶株ESBLs相關編碼基因bla，對擴增產物分別用限制性內切酶PstI和PvuII酶切，運用限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析各菌株ESBLs的基因型別。 結果：本研究分離得到176株ExPEC，其中158株表現(xiàn)為多重耐藥，占全部菌株數(shù)的89．77％。85株對第三代頭孢類抗生素耐藥，占全部菌株數(shù)的48．30％。這些菌株對喹諾酮類和氨基糖苷類的耐藥率也分

4、別達76％和35％以上。腸道外致病性大腸埃希菌對第三代頭孢類抗生素和對氨基糖苷類及喹諾酮類抗菌藥物的耐藥存在一定的相關性。對ESBLs進行初篩，得到74株ESBLs可疑陽性菌，對其進行表型確證試驗，可以確證得到59株產ESBLs菌，故本地ESBLs菌的檢出率為33．52％。肉湯微量稀釋法重復檢測結果顯示，大腸埃希菌ATCC25922為非ESBLs菌的符合率為100％，肺炎克雷伯菌ATCC700603為產ESBLs菌的符合率也為1.00％

5、，可見該方法相當可靠；真實性檢驗結果顯示，該方法的敏感度、特異度分別高達96．61％，100％，其觀察一致值可高達97．83％，陽性預測值為100％。脈沖場凝膠電泳結果顯示，各產酶菌株具有多條質粒譜帶，表明本研究ExPEC為非重復株。隨機抽樣的44株產ESBLs大腸埃希菌中，38株經聚合酶鏈式反應可擴增出大小為544bp的目的條帶，占所檢測的ESBLs菌株數(shù)的86．36％，陽性擴增產物經RFLP分析發(fā)現(xiàn)，31株可被限制性核酸內切酶Pvu

6、II切割成472bp和72bp兩個片段，表明其為CTX．M．14型ESBLs；7株可被限制性核酸內切酶PvuII切割成267bp、156bp和121bp三個片段，屬于CTX．M．1亞群的ESBLs，其具體型別有待于進一步鑒定。 結論：(1)腸道外致病性大腸埃希菌對常用抗生素的耐藥性已經到了相當嚴重的地步，必須采取措施有效控制。(2)多重耐藥菌的出現(xiàn)可能是抗生素選擇壓力所致。(3)本地區(qū)腸道外致病性大腸埃希菌中ESBLs的檢出率相

7、當高，以CTX．M．14型為主，同時存在CTX．M．1亞群的ESBLs，它們的出現(xiàn)嚴重地威脅了本地醫(yī)院的抗感染治療，合理使用抗菌藥物以降低耐藥性和采取有效措施控制其傳播非常重要。(4)本研究建立的肉湯微量稀釋法確證ESBLs具有相當高的真實性和可靠性，其效益分析也很好，可望在基層醫(yī)院的ESBLs耐藥性監(jiān)測工作中推廣使用。(5)本研究中采用的PCR-RFLP技術可快速、準確、便捷地檢測ESBLs的編碼基因并確定它們的基因型，結果可靠，適于