CX3CL1及其受體CX3CR1調(diào)節(jié)腎癌細胞遷移、轉(zhuǎn)移及其臨床意義的研究.pdf

1、目的:
　　 腎細胞癌是腎組織腫瘤中最常見的一種腫瘤，而在腎細胞癌中又以腎透明細胞癌最為常見。鑒定調(diào)節(jié)腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵性蛋白對于這種致命性惡性腫瘤的預后預測、預防轉(zhuǎn)移及治療均具有重要意義。在本研究中，我們評估了幾種常見腎癌細胞系及腎癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶組織芯片中趨化因子CX3CL1及其受體CX3CR1的表達情況，分析了CX3CL1及其受體CX3CR1在腎癌細胞粘附、遷移和轉(zhuǎn)移中的作用及CX3CR的表達與腎透明細胞癌患者預后的關(guān)系，

2、并且進一步研究了與CX3CL1-CX3CR1誘導的腎癌細胞遷移和轉(zhuǎn)移相關(guān)的下游分子信號通路。
　　 方法:
　　 1.采用western-blotting實驗方法和免疫熒光實驗驗方法檢測CX3CL1及其配體CX3CR1在腎癌細胞系和正常腎組織上皮細胞293T中的表達情況;
　　 2.采用劃痕實驗和趨化運動實驗方法檢測CX3CR1配體CX3CL1對腎癌細胞運動能力的影響;
　　 3.采用MTT細胞增殖實驗檢

3、測CX3CL1對腎癌細胞增殖能力的影響;
　　 4.采用免疫組化實驗方法檢測CX3CL1及其配體CX3CR1在78例原發(fā)腎癌組織芯片、16例正常腎皮質(zhì)組織芯片和16例轉(zhuǎn)移性腎癌組織芯片中的表達，分析CX3CR1表達和腎癌轉(zhuǎn)移及預后的關(guān)系;
　　 5.采用western-blotting實驗方法和inhibitory migration方法檢測與CX3CL1-CX3CR1誘導的腎癌細胞運動相關(guān)的下游信號通路。
　　

4、 結(jié)果:
　　 1.與正常人類胚胎源性腎組織上皮細胞293T相比，4種腎癌細胞系(786-O、Caki-1、A-498、SN12C)中CX3CR1的表達水平明顯增高，而4種腎癌細胞系中CX3CL1的表達量則明顯少于293T細胞。A-498和786-O胞膜上和細胞質(zhì)中均有CX3CR1表達，Caki-1和SN12C僅有細胞質(zhì)中表達CX3CR1;
　　 2.CX3CL1可以誘導膜表面高表達CX3CR1的腎癌細胞系趨化和遷移運動

5、;
　　 3.CX3CL1與其G蛋白偶聯(lián)受體受體CX3CR1結(jié)合后可以介導腎癌細胞系786-O中PI3K/Akt和MEK/ERK1/2信號通路的激活;
　　 4.CX3CL1誘導的腎癌細胞趨化運動依賴于Go/Gi-CX3CR1激活的PI3K/Akt和 MEK/ERK1/2信號通路;
　　 5.腎透明細胞癌組織芯片免疫組化分析結(jié)果顯示，CX3CR1表達量越高，腫瘤越容易出現(xiàn)術(shù)后轉(zhuǎn)移（P＜0.005），且CX3CR1

6、的強表達與腫瘤患者的不良預后之間存在一個顯著的正相關(guān)關(guān)系（P＜0.01）;
　　 6.腎癌轉(zhuǎn)移灶組織芯片免疫組化分析結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)移灶中CX3CR1的表達明顯高于腎癌原發(fā)灶(P＜0.005);
　　 7.與正常腎組織樣本相比，腎透明細胞癌組織芯片中CX3CL1的表達陽性率極低，但腫瘤血管內(nèi)皮細胞可表達CX3CL1。
　　 結(jié)論:
　　 1.與正常腎組織細胞相比，腎癌細胞系中CX3CR1表達水平增高，而CX3