人工感染鴨源新城疫病毒對(duì)鴨免疫功能作用的分子機(jī)制.pdf

1、新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus，NDV)引起的禽類烈性傳染病，在全球廣泛流傳，嚴(yán)重制約著養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展和禽產(chǎn)品安全。傳統(tǒng)理論認(rèn)為，鴨對(duì)NDV不敏感，但從NDV的演化進(jìn)程看，有導(dǎo)致鴨ND流行的危險(xiǎn)。由于NDV具有基因型種類多，變異進(jìn)化速度快的特點(diǎn)，常導(dǎo)致鴨對(duì)疫苗免疫效果不佳，致使疾病防控難度加大。因此，深入了解NDV感染后，鴨先天免疫因子抗病毒作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)

2、制，對(duì)提高鴨的機(jī)體免疫力，降低感染幾率顯得極為重要。
　　為探討鴨的天然防御系統(tǒng)抗NDV感染的免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制，本試驗(yàn)選用39只20日齡SPF紹鴨，隨機(jī)分為攻毒組27只和對(duì)照組12只。對(duì)照組不攻毒，攻毒組采用點(diǎn)眼滴鼻的途徑接種鴨源NDV強(qiáng)毒(Md/CH/LGD/1/2005)。分別在攻毒后的24 h和48 h，從對(duì)照及攻毒組各隨機(jī)取6只鴨屠宰，分別采集腎臟、肺臟、氣管、腺胃、骨髓、脾臟、盲腸扁桃體、哈德氏腺、法氏囊等9個(gè)組織。剩余

3、15只鴨子每天持續(xù)觀察，并于攻毒后24h、48h、72h、5d采集咽喉及泄殖腔拭子，以確定排毒和排毒時(shí)間。每隔4d采血一次直至24d對(duì)其抗體變化進(jìn)行檢測(cè)。采集的全部組織運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)樣品中8種Toll樣受體(Toll-likereceptors，TLRs)、11種鴨防御素(Avian beta defensins，AvBDs)、7種細(xì)胞因子和4種相關(guān)免疫因子表達(dá)量的變化。
　　通過(guò)觀察發(fā)現(xiàn)，感染鴨源NDV強(qiáng)毒后

4、，鴨沒(méi)有發(fā)病和死亡情況發(fā)生，對(duì)其抗體水平的檢測(cè)結(jié)果顯示，該NDV能夠誘導(dǎo)鴨體內(nèi)產(chǎn)生NDV特異抗體。對(duì)攻毒后鴨排毒情況的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在感染過(guò)程中均可在咽喉和泄殖腔內(nèi)檢測(cè)到NDV，且在檢測(cè)的時(shí)間內(nèi)，試驗(yàn)鴨排毒開(kāi)始于攻毒后第1d，到第5d停止。
　　通過(guò)對(duì)感染鴨NDV24 h和48 h后各組織器官中TLRs、AvBDs、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子和細(xì)胞因子基因的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示:經(jīng)NDV強(qiáng)毒感染后，除TLR4外，TLR1、TLR2、TLR3、T

5、LR5、TLR7、TLR15、TLR21在大部分組織中均表達(dá)，且表達(dá)量都有上調(diào)的趨勢(shì)。其中，同對(duì)照組相比TLR2、3、7在脾臟中表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)。感染鴨源NDV后，視黃酸誘導(dǎo)基因蛋白Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ，RIG-Ⅰ)在組織中廣泛分布，在大部分組織中表達(dá)量均上調(diào)，特別在24h脾臟、盲腸扁桃體和哈德氏腺等免疫器官中上調(diào)顯著(P＜0.05)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，NDV誘導(dǎo)后，AvBD1、AvBD5

6、、AvBD9、AvBD16在大部分組織中表達(dá)量升高，且在個(gè)別組織內(nèi)表達(dá)量升高顯著。其中與對(duì)照組相比，鴨AvBD5在盲腸扁桃體中表達(dá)量較高(P＜0.05)，AvBD16在肺臟及脾臟組織中表達(dá)顯著高于對(duì)照(P＜0.05)。感染鴨源NDV后，髓樣分化因子(myeloid differentiationfactor88，MyD88)在9種組織中均被誘導(dǎo)表達(dá)，且與對(duì)照相比在脾臟、盲腸扁桃體及哈德氏腺等組織中表達(dá)量明顯增加(P＜0.05)。白細(xì)胞介

7、素2（Interleukin-2，IL-2）在哈德氏腺中表達(dá)量增加，與MyD88和TLR7的變化趨勢(shì)相同。經(jīng)NDV感染后，同對(duì)照組相比鴨白介素6(Interleukin-6，IL-6)在脾臟中表達(dá)量明顯升高，干擾素γ（Interferon-γ，IFN-γ）在腎臟中上調(diào)顯著(P＜0.05)。感染鴨源NDV后，調(diào)控蛋白細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶2(Extracellular regulated protein kinases2，ERK2)及凋亡基因

8、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase3，Caspase-3)表達(dá)水平在脾臟(24 h)中顯著提高。
　　綜上所述，本研究所用紹鴨對(duì)鴨源NDV（Md/CH/LGD/1/2005毒株）不敏感，但該株NDV能夠誘導(dǎo)機(jī)體從感染后4d產(chǎn)生特異抗體。經(jīng)NDV感染后， TLRs（2，3和7）在脾臟組織中表達(dá)量顯著升高(P＜0.05);RIG-Ⅰ在24h脾臟、盲腸扁桃體和