積雪草抗抑郁成分的質量控制與β-石竹烯的藥動學研究.pdf

1、積雪草Centella asiatica(L.) Urb.為傘形科積雪草屬(Centella)植物積雪草的干燥全草，具有清熱利濕、解毒消腫之功效。積雪草中的化學成分主要有三萜類、黃酮類、多炔烯烴類和揮發(fā)油類等，臨床上多用于濕熱黃疽、中暑腹瀉、砂淋血淋、癰腫瘡毒、跌補損傷等癥。近代研究表明，積雪草總苷（羥基積雪草苷和積雪草苷是其主要活性成分）和揮發(fā)油類成分（β-石竹烯是其主要活性成分）有抗抑郁作用。為此，本課題以積雪草抗抑郁成分為研究對象

2、，從以下幾個方面展開研究:
　　 一、近紅外光譜技術在線監(jiān)測積雪草藥材提取物中羥基積雪草苷和積雪草苷的大孔樹脂分離純化過程
　　 首先建立羥基積雪草苷和積雪草苷的HPLC含量測定方法。然后，采用煎煮法得到積雪草藥材水提物，用處理好的D101大孔樹脂進行分離純化，先后用去離子水、0.1％ NaOH-10％乙醇水溶液、10％乙醇水溶液洗脫至無色，再用50％乙醇洗脫并收集洗脫液，每隔5min收集洗脫液10mL，作為1個樣本，采

3、集其近紅外光譜圖，并取樣進行HPLC分析，結合PLS法建立上述收集液的NIR光譜與其中羥基積雪草苷和積雪草苷的定量分析模型，結果顯示羥基積雪草苷和積雪草苷模型的R2分別為96.44和96.07，RMSECV分別為0.08480和0.00099。再用驗證集樣本來評價模型的準確性和預測效果，結果表明此模型預測效果良好，該方法快速、簡便、準確，可用于生產(chǎn)過程中羥基積雪草苷和積雪草苷的在線監(jiān)測和質量控制。
　　 二、積雪草揮發(fā)油成分的G

4、C-IT-MS法分析及體外抗氧化活性研究
　　 采用水蒸氣蒸餾法提取積雪草揮發(fā)油，并用GC-IT-MS技術對其化學成分進行分析，共鑒定了45個化合物，主要為萜類成分，包括單萜、倍半萜及它們的含氧衍生物。以VitC為陽性對照藥物，研究積雪草揮發(fā)油對·OH、DPPH及ABTS+自由基的清除能力，從而反映它的抗氧化活性，結果表明積雪草揮發(fā)油能明顯清除·OH、DPPH和ABTS+自由基，且IC50分別為0.5629、2.6643和0.6

5、683 mg/mL。
　　 三、β-石竹烯/β-環(huán)糊精包合物的制備及理化性質表征
　　 采用共沉淀法制備β-石竹烯/β-環(huán)糊精包合物，并用UV-vis、DTA和FT-IR法驗證了包合物的形成，水蒸氣蒸餾法測定了β-石竹烯的包合率為62.04％。按照2010版《中國藥典》二部附錄XC中的槳法研究了包合物分別在鹽酸（0.1 mol/L）和磷酸鹽緩沖液(pH6.8)兩種溶出介質中的溶出度，90 min后，β-石竹烯的累積釋放率

6、分別約為90％和60％，溶出度結果表明包合物中的β-石竹烯有較好的體外溶出度，提示將β-石竹烯制成β-環(huán)糊精包合物后能改善β-石竹烯的生物利用度。
　　 四、β-石竹烯在SD大鼠體內的藥動學研究
　　 首先建立快速、靈敏的測定SD大鼠血漿和組織樣品中β-石竹烯含量的GC-MS/SIM方法，生物樣品前處理方法為液液萃取。按照《化學藥物非臨床研究技術指導原則》的基本要求進行完整的方法學考察，結果表明生物樣品中內源性物質不干擾

7、β-石竹烯的測定，且在0.053～5.30μg/mL范圍內線性關系良好，方法的準確度、精密度、絕對回收率、基質效應及穩(wěn)定性均滿足生物樣品定量分析要求，表明該方法可用于β-石竹烯在SD大鼠體內的藥動學研究。
　　 用已建立的GC-MS/SIM方法測定了SD大鼠分別單劑量口服β-石竹烯水溶液50mg/kg及β-石竹烯/β-環(huán)糊精包合物水溶液三個劑量組(分別相當于等劑量β-石竹烯25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg)

8、后不同時間點血漿中β-石竹烯的濃度，經(jīng)非房室模型估算藥代動力學參數(shù)，初步明確了其在SD大鼠體內的藥代動力學特征。結果表明，以β-石竹烯水溶液50 mg/kg為參比，估算口服包合物水溶液50 mg/kg后β-石竹烯的平均相對生物利用度(AUC0-12h)為264.63士126.54％，即將β-石竹烯制成包合物后相對生物利用度提高了約2.6倍。分別單劑量口服包合物水溶液25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg三個劑量后，結果顯

9、示β-石竹烯的AUC0-12h與給藥劑量基本成正相關關系，相關系數(shù)r為0.9989，表明β-石竹烯在SD大鼠體內的動力學過程屬于線性藥物動力學。
　　 此外，采用GC-MS/SIM法測定SD大鼠單劑量口服包合物水溶液50 mg/kg后不同時間點各組織中β-石竹烯的濃度，了解其組織分布特點和效應靶器官。結果表明，在3h時各組織中β-石竹烯的濃度達到了最大值。其中，肝部藥物濃度最高，心、腎和腦藥物濃度次之，脾和肺藥物濃度最少。肝部濃