損傷肝臟條件培養(yǎng)液體外誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)胞分化為肝細(xì)胞的研究.pdf

1、目的：探討小鼠骨髓單個核細(xì)胞(bonemarrowmononuclearcells，BMMNCs)在體外誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的可行性及其方法。 方法：將CCl4肝損傷小鼠的肝臟進(jìn)行培養(yǎng)，收集上清，添加到培養(yǎng)液中誘導(dǎo)BMMNCs分化。倒置顯微鏡連續(xù)觀察細(xì)胞分化過程的形態(tài)學(xué)變化。培養(yǎng)1,7，14，21天時，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測各組細(xì)胞甲胎蛋白(AFP)、細(xì)胞角蛋白18(CK18)、細(xì)胞角蛋白19(CK19)、肝細(xì)胞核因

2、子3β(HNF3β)、酪胺酸胺基轉(zhuǎn)移酶(rAT)和白蛋白(ALB)基因的表達(dá)，免疫熒光反應(yīng)檢測AFP、CK18、CK19、ALB蛋白水平的表達(dá)；高碘酸—希夫反應(yīng)(PAS反應(yīng))檢測細(xì)胞糖原合成。 結(jié)果：誘導(dǎo)組細(xì)胞出現(xiàn)肝細(xì)胞樣形態(tài)變化；培養(yǎng)第7天出現(xiàn)AFP、CK19基因表達(dá)，其中AFP第14天表達(dá)增強，第21天表達(dá)減弱；第14天開始出現(xiàn)ALB、CK18、HNF3β基因表達(dá)，而后持續(xù)表達(dá)到21天；第21天出現(xiàn)TAT表達(dá)。免疫熒光反應(yīng)表