Survivin在BCR-ABL轉化白血病細胞中的表達調控、作用與治療策略的研究.pdf

1、背景：BCR/ABL可組成性激活多種不同的信號途徑，形成了一個非常復雜的網絡系統(tǒng)，在很大程度上，這些信號最終傳遞至細胞核內并調控凋亡和生存相關基因的表達，從而延緩白血病細胞的凋亡，促進細胞存活，維持惡性細胞和克隆在體內長期存活和聚積。Survivin是一個凋亡抑制因子家族(IAP)成員，在腫瘤的形成過程中發(fā)揮著多重效應，是腫瘤細胞凋亡和分裂的界面分子，并參與基因組復制檢測點的監(jiān)測和腫瘤的血管新生，因而成為腫瘤治療的一個理想靶點。最近，有

2、研究表明BCR/ABL能夠激活survivin的表達，并提示survivin可能是CML發(fā)展過程中一個重要的分子。然而，關于survivin在CML細胞中的具體調控機制和生物學作用還不清楚。 目的：以BCR/ABL轉化的造血細胞系為研究模型，系統(tǒng)探討survivin表達調控的信號途徑和分子機理，以及這一信號網絡在BCR/ABL介導的細胞惡性轉化和抗凋亡調控中的作用，與此同時尋找其中關鍵分子作為靶點，觀察其在抗白血病治療中的效應。

3、 方法：半定量PCR、Westernblot、免疫熒光、流式細胞儀技術比較BCR/ABL轉化細胞和對照細胞中survivin的表達和細胞內定位?？寺『蜆嫿╯urvivin啟動子與螢光素酶基因融合的報告載體，使用缺失突變和定點突變的方法鑒定survivin啟動子上BCR/ABL相關的作用元件。凝膠電泳遷移試驗(EMSA)和染色質免疫共沉淀(CHIP)技術分別在體外和活細胞水平上證實c-Myc與survivin啟動子的結合作用。We

4、sternblot分析CML細胞中c-Myc和survivin表達的相關性。應用MAPK、P13K、JAK2的特異性阻斷劑進一步闡明c-Myc介導的survivin表達的相關信號途徑。采用逆轉錄病毒介導的基因轉移和表達技術以及shRNA干擾技術，闡明c-Myc和survivin在BCR/ABL介導的細胞轉化和抗凋亡中的作用。最后，應用c-Myc特異性阻斷劑-10058-F4，觀察其單獨應用和聯(lián)合伊馬替尼對CML細胞的凋亡誘導效應，以及對

5、BCR/ABL激酶依賴和非依賴的伊馬替尼耐藥的逆轉作用。 結果：BCR/ABL轉化的細胞系中survivin表達顯著升高，伊馬替尼能夠抑制其表達并主要影響其在細胞漿的分布。BCR/ABL對survivin表達的調控不依賴于細胞周期和mRNA的穩(wěn)定性，主要作用于其轉錄水平上。BCR/ABL通過JAK2和P13K交聯(lián)的信號途徑激活c-Myc的表達和活性，后者與survivin啟動子上的E-box元件結合，從而增強survivin在C

6、ML細胞中的表達。并且survivin與c-Myc的表達呈一定的相關性。Survivin表達與伊馬替尼誘導的細胞凋亡之間存在著動力學的關系，其表達下調是CML細胞凋亡的一個早期事件，survivin過表達能部分抵抗伊馬替尼和去除細胞因子引起的細胞凋亡效應。shRNA干擾c-Myc和survivin表達顯著抑制K562細胞在甲基纖維素半固體培養(yǎng)基中的克隆形成能力。10058-F4抑制c-Myc活性并能夠誘導細胞凋亡，具有與伊馬替尼協(xié)同效應

7、。此外，細胞因子I-一3能以BCR/ABL激酶非依賴的機制誘導CML細胞對伊馬替尼的耐受，而10058-F4能夠抵抗IL-3的抗凋亡作用。同時，10058-F4還能增強BCR/ABL依賴的耐藥細胞K562/G01對伊馬替尼的敏感性。 結論：JAK2/P13K介導和c-Myc依賴的survivin表達是BCR/ABL下游分子信號網絡的一條新的轉錄調控途徑，并參與對細胞轉化和凋亡的調節(jié)，抑制此通路中的關鍵分子節(jié)點可作為慢性髓細胞白血