腦紅蛋白對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、腦紅蛋白(Ngb)是2000年被發(fā)現(xiàn)的人體內(nèi)第三類攜氧球蛋白，主要位于腦組織內(nèi)。隨即人們對(duì)它是否對(duì)腦缺血缺氧性損害有保護(hù)作用及其作用機(jī)理產(chǎn)生強(qiáng)烈興趣并進(jìn)行了深入研究。目前多個(gè)研究顯示：在腦缺血/缺氧時(shí)Ngb的表達(dá)升高，而且通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)使腦內(nèi)Ngb表達(dá)升高后可以顯著減小腦梗死體積，這表明Ngb對(duì)腦缺血缺氧性損傷有保護(hù)作用。然而至今未見關(guān)于Ngb是否對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷有保護(hù)作用的研究報(bào)道。 本課題的目的在于應(yīng)用重組Ngb腺病毒載體使大

2、鼠腦內(nèi)高表達(dá)Ngb，通過(guò)觀察大鼠腦創(chuàng)傷后的病理變化，探討Ngb對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷有無(wú)保護(hù)作用。 第一部分，成功建立硬膜外撞擊中度局灶性腦損傷模型，觀察損傷后的病理變化并證實(shí)傷灶周圍皮質(zhì)及同側(cè)海馬CA1區(qū)Ngb的表達(dá)升高，確定上述區(qū)域?yàn)橹攸c(diǎn)觀察對(duì)象。 第二部分，對(duì)重組腺病毒載體在大鼠腦內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率進(jìn)行研究，考察它能否有效轉(zhuǎn)染傷灶周圍皮質(zhì)及海馬．結(jié)果顯示：腺病毒注射在胼胝體通過(guò)逆軸漿運(yùn)輸可以高效轉(zhuǎn)柒傷側(cè)皮質(zhì)神經(jīng)元；通過(guò)多點(diǎn)注射可

3、以使傷側(cè)CA1區(qū)全部被轉(zhuǎn)染，表明腺病毒載體可以滿足實(shí)驗(yàn)要求。 第三部分，建立重組Ngb腺病毒載體，并通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用PCR、免疫組織化學(xué)和Western Blot技術(shù)證明它能高效轉(zhuǎn)染細(xì)胞或大鼠腦組織且正確表達(dá)Ngb。 第四部分，將重組Ngb腺病毒載體立體定向注入腦內(nèi)，使Ngb高表達(dá)，然后施以大鼠局灶性中度腦損傷。結(jié)果顯示：損傷灶體積較對(duì)照組明顯減??；傷側(cè)海馬CA1區(qū)細(xì)胞丟失減少；凋亡細(xì)胞數(shù)明顯減少。