間充質(zhì)干細(xì)胞分離、擴增及定向成骨分化的蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、目的：探討用蛋白質(zhì)組學(xué)方法分析人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Msc)定向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化中細(xì)胞蛋白表達譜的改變。 方法：從人骨髓細(xì)胞中分離獲得MSC，經(jīng)細(xì)胞表型及多向分化能力測定鑒定MSC的純度和功能后，采用定向成骨細(xì)胞分化誘導(dǎo)培養(yǎng)體系，于分化后14天分別提取未分化細(xì)胞及分化后細(xì)胞的總蛋白，雙向電泳分析，確定蛋白差異點，經(jīng)酶切后行蛋白肽質(zhì)量指紋譜(Peptide Mass Fingerprinting)鑒定差異蛋白表達。 結(jié)果：白

2、骨髓中成功分離獲得間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)均一，為典型的紡錘狀，大約14d有超過80％的細(xì)胞融合。細(xì)胞表型分析為SH-3、4(CD73)、SH-2(CD105)、間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志CD166陽性，造血細(xì)胞表面標(biāo)志CD34、CD45陰性，純度在90％以上。細(xì)胞周期分析表明，只有3.2％的細(xì)胞處于活躍的增殖分裂期即S期，90％的細(xì)胞處于靜息期即G<,0>-G<,1>期。細(xì)胞在特定誘導(dǎo)條件下可分化為多種問質(zhì)細(xì)胞，如向脂肪分化，細(xì)胞內(nèi)有脂滴的形成；向成