皂角刺抗腫瘤活性成分與含量測(cè)定方法研究.pdf

1、本研究以皂角刺為研究對(duì)象，用MTT法測(cè)定抗腫瘤活性，采用體外抗腫瘤活性跟蹤與化學(xué)分離相結(jié)合的方法，確定了皂角刺的抗腫瘤活性成分，并以其為指標(biāo)對(duì)皂角刺藥材的質(zhì)量進(jìn)行控制。
　　 首先在確定皂角刺乙醇提取物具有抗腫瘤活性的前提下，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到不同萃取層，抗腫瘤活性測(cè)定顯示：70％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取層對(duì)Bel-7402、Hela和KB細(xì)胞株的抑制作用較強(qiáng)，IC50值分別為122.7μg·mL

2、-1、118.3μg·mL-1和145.9μg·mL-1。因此確定皂角刺70％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取層為抗腫瘤活性部位。
　　 取皂角刺9kg，用70％乙醇回流提取，乙酸乙酯萃取得到活性部位后，對(duì)其進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿-甲醇(100：0～0：100)為洗脫溶劑，以TLC為指導(dǎo)合并相同流分，對(duì)得到的七個(gè)流分進(jìn)行抗腫瘤活性試驗(yàn)。結(jié)果表明：流分Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖有較好的抑制作用，其對(duì)Bel-7402和Hela細(xì)胞株的IC50

3、分別為80.2/μg·mL-1、76.5μg·mL-1、76.3μg·mL-1和69.2μg·mL-1、79.9μg·mL-1、88.8μg·mL-1。
　　 進(jìn)一步采用硅膠柱層析、SephadexLH-20柱層析等多種手段對(duì)流分Ⅱ和Ⅳ的化學(xué)成分進(jìn)行了分離、純化和鑒定。從該活性部位中分離得到了8個(gè)化合物，利用理化性質(zhì)和光譜分析方法將其分別鑒定為：黃顏木素(1)、槲皮素(2)、3β-acetoxyolean-12-en-28-oi

4、cacid(3)、木栓酮(4)、棕櫚酸(5)、白樺醇(6)、β-谷甾醇(7)和胡蘿卜苷(8)。其中化合物2、3、4、5、6和8均為首次從皂角刺中分離。
　　 采用MTT法對(duì)以上8個(gè)化合物進(jìn)行抗腫瘤活性分析，結(jié)果表明：化合物1和3對(duì)多種體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞具有明顯的抗腫瘤活性。其中化合物3對(duì)Bel-7402、Hela、HT1080、KB、A549、SGC-7901和Heps等7種腫瘤細(xì)胞株生長(zhǎng)增殖具有良好的抑制作用，IC50為11.

5、6-18.7μg·mL-1?；衔?對(duì)除A549之外的6種腫瘤細(xì)胞株抑制作用良好，IC50為11.3-19.3μg·mL-1。由此可以推測(cè)化合物1和3為皂角刺抗腫瘤作用的活性成分。
　　 本實(shí)驗(yàn)對(duì)皂角刺中黃顏木素和槲皮素提取工藝進(jìn)行研究。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以黃顏木素和槲皮素的含量為考察指標(biāo)，對(duì)提取溶劑用量、提取時(shí)間和提取次數(shù)3個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化，確定皂角刺中黃顏木素和槲皮素的最佳提取工藝為加15倍量70％乙醇，回流提取2次，每次1h

6、。
　　 首次建立了同時(shí)測(cè)定皂角刺中黃顏木素和槲皮素的LC-MS分析方法。以Kromasil-C18(250×4.6mmi.d.，5μm)為色譜柱，乙腈-1％冰乙酸水溶液(30：70，v/v)為流動(dòng)相，流速0.8mL·min-1，柱溫35℃，采用ESI源，掃描方式為選擇離子監(jiān)測(cè)，檢測(cè)方式為正離子檢測(cè)，以黃豆苷元為內(nèi)標(biāo)，定量分析m/z287(黃顏木素)，m/z303(槲皮素)，m/z255(黃豆苷元)三個(gè)離子，對(duì)所收集的17批不同